[發明專利]一種從球毛殼菌中提取嗜氮酮類化合物的方法

有效

• 申請號: 201710859152.0
• 申請日: 2017-09-21
• 公開（公告）號: CN107674891B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 郭慶豐;陳林;尹震花;張娟娟;康文藝
• 申請（專利權）人: 黃河科技學院
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C12R1/645
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新

1.一種從球毛殼菌（Chaetomium globosum）中提取嗜氮酮類化合物的方法，嗜氮酮類化合物包括chaetoviridin A和chaetoviridin B，結構式如下：

；

其特征在于，所述方法包括以下步驟：

（1）菌種活化：將球毛殼菌接種到平板培養基上，常溫條件下培養3~5 d，獲得活化菌種；

（2）初級培養：將步驟（1）中得到的活化菌種接種到SD培養基中，在24~28 ℃條件下培養3~5 d ，得種子液；

（3）次級培養：將步驟（2）制備的種子液接種到SD培養基中，并加入8~12 μM組蛋白酶抑制劑，種子液的體積為SD培養基體積的1~5%，在24~28 ℃條件下培養20~30 d得發酵液；

（4）粗提物制備：將步驟（3）制備的發酵液減壓抽濾，得到的濾液經旋蒸濃縮，然后用乙酸乙酯萃取，萃取液經減壓濃縮得粗提物；

（5）硅膠柱層析：將步驟（4）制備的粗提物硅膠拌樣后裝柱，固定相為用200~300目硅膠柱，以二氯甲烷：甲醇體積比為100:1；90:1；80:1；70:1；60:1；50:1；40:1；30:1；20:1；10:1進行梯度洗脫，取二氯甲烷與甲醇的體積比為40:1的洗脫液，經薄層層析檢測，合并相同流份，流份備用；

（6）凝膠柱層析：將步驟（5）制備的流份經凝膠柱層析，并經薄層層析檢測合并相同組份，濃縮干燥備用；

（7）反相高效液相純化：將步驟（6）制備的組份用反相高效液相色譜純化，減壓濃縮干燥得chaetoviridin A和chaetoviridin B；

步驟（1）中菌種采用球毛殼菌Chaetomium globosum ATCC 6205；

所述步驟（3）中組蛋白酶抑制劑為辛二酰雙羥肟酸；

所述步驟（6）中凝膠柱層析所用凝膠為Sephadex LH-20，所選用的流動相為二氯甲烷：甲醇=1：1混合液；

所述步驟（7）中的反相高效液相色譜條件為：

色譜柱：YMC C18 ，5 μm，250×10 mm；

流動相組成為乙腈∶水＝ 70∶30；

流速：2 mL/min；

柱溫：25 ℃；

檢測波長：230，254 nm；

進樣量：20 μL；

保留時間：t_R1=22.9 min、t_R2=15.5 min。

2.根據權利要求1所述從球毛殼菌中提取嗜氮酮類化合物的方法，其特征在于，所述平板培養基的配方為：蛋白胨10.0 g/L、酵母浸出粉10.0 g/L、葡萄糖40.0 g/L、瓊脂20.0 g/L，pH 6.0±0.1；所述SD培養基的配方為：蛋白胨10.0 g/L、葡萄糖40.0 g/L，pH 自然。

3.根據權利要求1所述從球毛殼菌中提取嗜氮酮類化合物的方法，其特征在于，步驟（4）中粗提物制備步驟為：將步驟（3）制備的發酵液減壓抽濾，得到的濾液經旋蒸濃縮至原來體積的1/5，然后用等體積的乙酸乙酯萃取3次，萃取液經減壓濃縮得粗提物，回收乙酸乙酯。