[發明專利]一種連續深層發酵提取食用菌活性物質的方法

有效

• 申請號: 201710858207.6
• 申請日: 2017-09-21
• 公開（公告）號: CN107502556B
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 戚海冰
• 申請（專利權）人: 濟寧利馬菌業有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N11/04;C12N11/10;C12N13/00;C12P1/02;C12R1/645
• 代理公司: 南寧深之意專利代理事務所(特殊普通合伙) 45123
• 代理人: 徐國華

1.一種連續深層發酵提取食用菌活性物質的方法，其特征在于,包括以下步驟：

A1：取食用菌菌絲或子實體，洗凈，干燥至水分含量為6~8%后，將其粉碎至100~120目獲得粉末，將粉末與水按料液比1：（40~60）混合均勻，滅菌后得到種子料；

A2：取將A1所得種子料在無菌條件下按15~20%的接種量接種至滅菌后的種子液培養基中，然后置于搖床上并通入電磁場培養24~96小時，培養溫度23~25℃，得種子液；

A3：將A2所得種子液離心獲得的沉淀物，在無菌條件下與磁性海藻酸鈉溶液混合均勻得到混合液；將混合液通過注射器滴入氯化鈣溶液進行固化20~30min，得到磁性載菌體海藻酸鈣凝珠；將磁性海藻酸鈣凝珠用蒸餾水洗滌2~3次，然后與滅菌后的壁材溶液在無菌條件下混合，200~230rpm轉速下振蕩15~30min進行成膜反應，得到磁性載菌體微膠囊；

所述的磁性海藻酸鈉溶液，是將磁性材料加入到20~25mg/ml海藻酸鈉溶液中混合均勻制備而得；所述壁材溶液濃度為0.8~1.2mg/ml；所述的氯化鈣溶液濃度為18~22mg/ml；所述混合液與氯化鈣溶液體積比為1：（1.5~2）；所述磁性海藻酸鈣凝珠與壁材溶液體積比為1：（5~10）；

A4：將深層發酵培養基按發酵罐體積的60~80%加入發酵罐中，攪拌均勻后，將發酵罐封好進行滅菌；待深層發酵培養基冷卻后，將F3所得磁性載菌體微膠囊按接種量為10~12%接種至深層發酵培養基中得到深層發酵液；調節深層發酵液pH為5.2~6.2，控制深層發酵溫度為22~25℃，無菌空氣通氣量為2.0~2.2m³/min，攪拌速度50~100r/min，罐壓38~45kPa，并通入高壓脈沖電場進行深層發酵，發酵72~168小時后，排出深層發酵醪液；

所述深層發酵培養基含有以下重量百分比的組分：碳源3~5%、氮源0.15~0.3%、大豆分離蛋白3~5%、礦物質鹽0.6~0.9%、促進劑1~1.8%、生長因子2~4%、組合氨基酸Ⅰ0.5~0.7%；所述的組合氨基酸Ⅰ為谷氨酸與甘氨酸1:1組合；

所述碳源為葡萄糖、蔗糖、果糖、麥芽糖、玉米粉、山芋粉、豆粕、可溶性淀粉中的一種或一種以上組合；

所述氮源為蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、酵母膏、黃豆餅粉、玉米粉、硫酸銨、硝酸鉀中一種或一種以上組合；

所述的礦物質鹽為硫酸亞鐵、氯化鈉、硫酸鎂、氯化鉀、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、硫酸鋅、氯化鋅中的一種或一種以上組合；

所述促進劑為橄欖油、中藥提取物、茶葉提取物、垂盆草、板藍根中的一種或一種以上組合；

所述生長因子為蜂花粉、玉米粉、山茶油、枸杞粉中一種或一種以上組合；

A5：將A4所得發酵醪液，過濾后，即可得到含有食用菌活性物質的溶液。

2.根據權利要求1所述的一種連續深層發酵提取食用菌活性物質的方法，其特征在于：A1所用食用菌為銀耳、靈芝、冬蟲夏草、香菇、松乳菇、猴頭菇、金針菇、茯苓中一種。

3.根據權利要求1所述的一種連續深層發酵提取食用菌活性物質的方法，其特征在于：A1所述種子液培養基pH為5~7，含有以下重量分數比的組分：葡萄糖30~40份、蛋白胨15~25份，促進劑0.1~0.3份，KH₂PO₄0.8~1.2份，MgSO₄?7H₂O0.5~1份，組合氨基酸Ⅱ0.9~1.1份；所述促進劑為酵母粉、VB₂、VB₆、橄欖油、茶葉提取物、蠶蛹粉中一種或一種以上組合；所述組合氨基酸Ⅱ為先加入谷氨酸和甘氨酸1:1組合0.5~0.6份，再加入甘氨酸和絲氨酸1:1組合0.4~0.5份。

4.根據權利要求1所述的一種連續深層發酵提取食用菌活性物質的方法，其特征在于：A1所述電磁場強度為10~20mT，作用時間5~20min/h。

5.根據權利要求1所述的一種連續深層發酵提取食用菌活性物質的方法，其特征在于：A3所述的磁性材料為分析純等級的四氧化三鐵，在磁性海藻酸鈉溶液中含量為0.004~0.006g/ml。