[發明專利]一種利用尿嘧啶營養缺陷型進行杏鮑菇菌種保護的方法

有效

• 申請號: 201710843960.8
• 申請日: 2017-09-19
• 公開（公告）號: CN107557354B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 鮑大鵬;周陳力;萬佳寧;盧緒志;余養朝;張光忠;茅文俊;吳瑩瑩;楊瑞恒;李燕;王瑩;汪瀅;唐利華;高英女;龔明
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院;江蘇華綠生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/04
• 分類號: C12N15/04;C12R1/645
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達;魏峯

本發明涉及一種利用尿嘧啶營養缺陷型進行杏鮑菇菌種保護的方法，包括：將杏鮑菇尿嘧啶營養缺陷型單核體NX2?0與杏鮑菇單核體菌株雜交，出菇后單孢分離獲得單核體菌株；將單核體菌株接種于5?氟乳清酸篩選培養基培養并進行鑒定，得到尿嘧啶營養缺陷型單核體菌株，然后通過單單雜交得到尿嘧啶營養缺陷型雙核體菌株。本發明方法簡單，成本低，使用常規的菌種分離方法得到的菌種無法正常的生長繁殖，可以有效對杏鮑菇菌種進行保護。

技術領域

本發明屬于杏鮑菇菌種保護技術領域，特別涉及一種利用尿嘧啶營養缺陷型進行杏鮑菇菌種保護的方法。

背景技術

杏鮑菇(Pleurotus eryngii)又名刺芹側耳，是一種品質優良的大型傘菌，具有高蛋白，富含膳食纖維，食用價值很高，不僅能夠降血壓、血脂，而且其含有的多糖對某些腫瘤也有一定的抑制作用，能夠增強人體的免疫力、降低脈粥樣硬化的風險。杏鮑菇的栽培和生產的發展在很大程度上必須依賴菌種。而菌種的選育只有依靠長期的積累才能有所收獲，其中投入了大量的人力物力和時間成本。但是由于杏鮑菇可以進行無性繁殖，其菌種生產工藝具有可復制性，使得容易被仿冒。

營養缺陷型菌株由于基因發生突變喪失了合成某種物質的能力，在基本培養基中無法正常生長，必須補充某些物質才可以正常生長。如果無法明確知道究竟是何種營養缺陷其生產會受到極大限制，可以使得育種者的知識產權得到充分的保護。

杏鮑菇作為深受消費者喜愛的食用菌采用營養缺陷標記具有更高的安全性。常見的營養缺陷型菌株的篩選標記有腺嘌呤、蛋氨酸、尿嘧啶、色氨酸、核菌素、精氨酸、亮氨酸、脯氨酸、肌醇等。在杏鮑菇的遺傳研究中，尿嘧啶合成的兩種關鍵酶基因pyrF與pyrF已經被成功克隆，這為杏鮑菇尿嘧啶營養缺陷型的研究提供了一定的理論基礎。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種利用尿嘧啶營養缺陷型進行杏鮑菇菌種保護的方法，該方法簡單，成本低，使用常規的菌種分離方法得到的菌種無法正常的生長繁殖，可以有效對杏鮑菇菌種進行保護。

本發明的一種利用尿嘧啶營養缺陷型進行杏鮑菇菌種保護的方法，包括：

將杏鮑菇尿嘧啶營養缺陷型單核體NX2-0與杏鮑菇單核體菌株雜交，出菇后單孢分離獲得單核體菌株；將單核體菌株接種于5-氟乳清酸篩選培養基培養并進行鑒定，得到尿嘧啶營養缺陷型單核體菌株，然后通過單單雜交得到尿嘧啶營養缺陷型雙核體菌株。

所述杏鮑菇尿嘧啶營養缺陷型單核體NX2-0的保藏編號為：CGMCC NO.12880。擴增后的pyrF基因序列如SEQ ID NO.1所示。保藏日為2016年9月19日，保藏單位CGMCC（中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，北京市朝陽區北辰西路1號院3號），建議分類命名為：杏鮑菇(Pleurotus eryngii)。

所述出菇為在木屑培養基上出菇。

所述5-氟乳清酸篩選培養基的組成為：在基本培養基中添加0.05mmol/L的尿嘧啶及0.5g/L的5-氟乳清酸。

所述基本培養基的組成為：KH₂PO₃ 1.0g、(NH₄)₂HPO₃ 1.5g、MgSO₄·7H₂O 0.3g、Thiamine HCl 500μg、瓊脂粉15g，加水至1L，滅菌后倒平板備用。

所述尿嘧啶營養缺陷型雙核體菌株在不含尿嘧啶添加物的基本培養基中無法正常生長，在PDA培養基上生長速度低于野生型菌株，在添加尿嘧啶的PDAU培養基上生長速度提高。

有益效果