[發(fā)明專利]一種黑骨藤的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710836764.8
• 申請日: 2017-09-17
• 公開（公告）號: CN107607649B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設計）人: 劉育辰;劉剛;李悅;劉麗蘋;張葭;金文淵
• 申請（專利權）人: 貴陽中醫(yī)學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 北京聯(lián)創(chuàng)佳為專利事務所(普通合伙) 11362
• 代理人: 郭防;張梅

1.一種黑骨藤的檢測方法，其特征在于：所述黑骨藤這樣提取：取黑骨藤藥材粉末，按料液比1:20～1:30加入60％～80％乙醇溶液，加熱回流提取2～4次，每次50～70min，合并提取液，提取液于70℃水浴蒸干，按料液比1:12.5加蒸餾水使成混懸液，分別依次用與混懸液等量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取3次，每次靜置1小時，將3次正丁醇萃取液合并，濃縮至干，即得；所述檢測方法包括含量測定方法，所述含量測定方法包括對綠原酸和杠柳毒苷的含量檢測；所述綠原酸和杠柳毒苷的含量檢測方法為：

照中國藥典附錄高效液相色譜法試驗：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：Xtimate C₁₈4.6mm×250mm,5μm；流動相：乙腈(A)-0.05％～0.15％磷酸水溶液(B)，梯度洗脫；檢測波長：200～240nm；柱溫：24～26℃；流速：0.8～1.2mL·min^-1；

梯度洗脫時，洗脫程序為：0～12min，9％→10％(A)，12～30min，10％→21％(A)，30～50min，21％→35％(A)，50～60min，35％→70％(A)；

混合對照品溶液的制備：精密稱取綠原酸對照品5.00～5.20mg，置于5mL容量瓶中，以流動相溶解、定容，配制成質量濃度為1.000～1.020mg·mL^-1的單一成分的綠原酸對照品溶液；精密稱取杠柳毒苷對照品8.30～8.50mg，置于10mL容量瓶中，以流動相溶解、定容，配制成質量濃度為0.83～0.85mg·mL^-1的單一成分的杠柳毒苷對照品溶液；再精密量取上述綠原酸對照品溶液1.5～2.5mL、杠柳毒苷對照品溶液0.5～1.5mL，置于50mL容量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻，配制成質量濃度分別為0.0406～0.0415mg·mL^-1和0.0165～0.0170mg·mL^-1的綠原酸和杠柳毒苷的混合對照品溶液；

供試品溶液的制備：精密稱取黑骨藤藥材粉末1.5～2.5g，按料液比1:20～1:30加入65％～75％乙醇溶液45～55mL，加熱回流提取2～4次，每次50～70min，合并提取液，提取液于70℃水浴蒸干，加20～30mL蒸餾水使成混懸液，分別依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取2～4次，取正丁醇萃取部位，濃縮至干，殘渣用適量甲醇溶解，轉移并定容置于10mL容量瓶中，搖勻，0.40～0.50μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液；

測定法：分別吸取混合對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.如權利要求1所述的黑骨藤的檢測方法，其特征在于：所述黑骨藤這樣提取：取黑骨藤藥材粉末，按料液比1:25加入70％乙醇溶液，加熱回流提取3次，每次1h，合并提取液，提取液于70℃水浴蒸干，按料液比1:12.5加蒸餾水使成混懸液，分別依次用與混懸液等量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取3次，每次靜置1h，將3次正丁醇萃取液合并，濃縮至干，即得。

3.如權利要求1所述的黑骨藤的檢測方法，其特征在于：所述流動相為乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)。

4.如權利要求1所述的黑骨藤的檢測方法，其特征在于：所述檢測波長為220nm；柱溫為25℃；流速為1.0mL·min^-1。

5.如權利要求1所述的黑骨藤的檢測方法，其特征在于：所述混合對照品溶液這樣制備：精密稱取綠原酸對照品5.08mg，置于5mL容量瓶中，以流動相溶解、定容，配制成質量濃度為1.016mg·mL^-1的單一成分的綠原酸對照品溶液；精密稱取杠柳毒苷對照品8.40mg，置于10mL容量瓶中，以流動相溶解、定容，配制成質量濃度為0.84mg·mL^-1的單一成分的杠柳毒苷對照品溶液；再精密量取上述綠原酸對照品溶液2mL、杠柳毒苷對照品溶液1mL，置于50mL容量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻，配制成質量濃度分別為0.0406mg·mL^-1和0.0168mg·mL^-1的綠原酸和杠柳毒苷的混合對照品溶液，即得。

6.如權利要求1所述的黑骨藤的檢測方法，其特征在于：所述供試品溶液這樣制備：精密稱取黑骨藤藥材粉末2.0g，按料液比1:25加入70％乙醇溶液50mL，加熱回流提取3次，每次60min，合并提取液，提取液于70℃水浴蒸干，加25mL蒸餾水使成混懸液，分別依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，取正丁醇萃取部位，濃縮至干，殘渣用適量甲醇溶解，轉移并定容置于10mL容量瓶中，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。