[發明專利]一種魚類免疫試劑

有效

• 申請號: 201710833158.0
• 申請日: 2017-09-15
• 公開（公告）號: CN107568117B
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 李其昌;陳善真;陳克宏;劉博奇;王志花
• 申請（專利權）人: 廣東海大畜牧獸醫研究院有限公司
• 主分類號: A01K61/13
• 分類號: A01K61/13;A61K39/00;A61P31/00;A61P37/04
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 李天星;彭成

本發明公開了一種魚類免疫方法，包括兩步：浸泡免疫：先用魚體表面處理液清洗魚體，后用疫苗浸泡液浸泡魚苗。每1L表面處理液含有0.05?2mL38?40wt％的甲醛溶液，0.001?0.0035g苯扎氯胺，0.04?0.08g乙醇酸和10?20mL甘油；每1L疫苗浸泡液含有50?200mL 0.01?0.1％的卡波姆，1?5mL的三乙醇胺，10?20mL的甘油和1×10⁶?1×10⁸CFU/mL的疫苗抗原；口服免疫：浸泡免疫后的魚苗隔12?48h后飼喂口服疫苗飼料。通過浸泡免疫與口服免疫的配合應用，提高魚體表皮的通透性，增加魚體對疫苗抗原的吸收效率，提高免疫效果，相對免疫保護率提高10％以上。

技術領域

本發明涉及水產養殖技術領域，尤其涉及一種魚類免疫方法。

背景技術

近幾十年來，魚用疫苗的發展相當迅速，在水產養殖中發揮的作用越來越大，疫苗的種類日益增多，分類方式也多種多樣。按免疫方式分為注射疫苗、浸泡疫苗和口服疫苗；按疫苗抗原成分類型分為菌體疫苗、亞單位疫苗、重組疫苗和DNA疫苗等，按照抗原制備方式分為滅活疫苗、減毒疫苗、基因缺失疫苗等。目前魚用疫苗的接種方法主要有三種：一是注射，二是浸泡，三是口服。注射法雖劑量準確，誘導免疫應答比其它幾種方法都強，但注射免疫費時費力，魚的應激反應也大，對魚苗和較小的魚類并不適用；浸泡免疫省時方便，是僅次于注射法的有效給藥途徑，并且可適用于難以實施注射的魚苗；口服免疫對魚體無損傷，操作方便，不受時間、地點、魚體大小的限制，也是容易實施的免疫途徑。

目前國產尚無上市的魚用浸泡和口服疫苗，已有報道多停留在研發階段。浸泡免疫在生產中，免疫效果受到多種因素影響，效果不佳；口服疫苗受胃腸道環境(pH太低、各種消化酶以及內容物)影響，疫苗抗原很難到達黏膜誘導位點而引起有效的免疫反應。而國外關于無乳鏈球菌感染羅非魚時，先通過粘附作用定植于羅非魚體表或腔道的粘液，且最主要感染途徑為胃腸道的研究報道，為其浸泡和口服疫苗的開發可行性奠定了理論基礎。因此改善魚類疫苗浸泡方式，研制新型口服疫苗的制備及免疫方法，是水產養殖健康、快速發展中亟待解決的問題。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種可方便快捷的應用于魚苗免疫的新型的浸泡免疫和口服疫苗制備及免疫方法，以及最佳的免疫操作規程，聯合應用這兩種免疫方法能夠顯著提高疫苗抗原進入機體的量，從而提高疫苗的免疫效果。

本發明的目的采用如下技術方案實現：

一種魚類免疫方法，包括：

浸泡免疫步驟：先利用魚體表面處理液清洗魚苗體表，然后用疫苗浸泡液浸泡免疫魚苗；

每1L表面處理液中含有0.05-2mL 38-40wt％的甲醛溶液，0.001-0.0035g苯扎氯胺，0.04-0.08g乙醇酸和10-20mL甘油；

每1L疫苗浸泡液中含有50-200mL 0.01-0.1％的卡波姆，1-5mL的三乙醇胺， 10-20mL的甘油和1×10⁶-1×10⁸CFU/mL的疫苗抗原；

口服免疫步驟：浸泡免疫后的魚苗隔12-48h后飼喂口服疫苗飼料；

每1kg口服疫苗飼料包括40-100g的口服疫苗佐劑，口服疫苗佐劑由以下按重量份計的以下組分組成：3-6份抗胃酸組分、2-5份胃消化酶抑制組分、2-5份促腸道吸收組分和2-6份多糖包裹組分；所述抗胃酸組分用于將疫苗在胃腸道局部的pH值調節為6.5-7.5；所述促腸道吸收組分用于協助運載疫苗擴散到黏膜細胞，包括表面活性劑、油酸類或增稠劑；所述多糖包裹組分為非蛋白類多糖。

進一步地，浸泡免疫步驟中，包括以下三個過程：

1)首次浸泡：利用魚體表面處理液浸泡魚苗1-3min；

2)洗滌：轉移至清水桶中洗滌1-2min；