[發明專利]一種無滅菌發酵生產聚羥基脂肪酸酯的方法

有效

• 申請號: 201710832790.3
• 申請日: 2017-09-15
• 公開（公告）號: CN109504714B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 葉健文;汪東升;陳風義
• 申請（專利權）人: 北京藍晶微生物科技有限公司
• 主分類號: C12P7/625
• 分類號: C12P7/625;C12R1/01
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 邰紅

1.一種以鹽單胞菌為生產菌無滅菌發酵生產聚羥基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)將鹽單胞菌接入發酵培養基中進行發酵培養；

(2)發酵進入對數期后，通過補加第一補料培養基進行第一階段補料發酵；

(3)第一階段補料發酵結束后，通過補加第二補料培養基進行第二階段補料發酵；

(4)第二階段補料發酵結束后，通過補加第三補料培養基進行第三階段補料發酵直至發酵結束，

其中，在以上步驟(2)中的第一補料培養基和步驟(3)中的第二補料培養基包含碳源和氮源，在以上步驟(4)中的第三補料培養基僅包含碳源，并且在以上步驟(3)的第二補料培養基中的氮源含量低于在以上步驟(2)的第一補料培養基中的氮源含量；

其中，在步驟(2)中，所述第一補料培養基中碳源與初始發酵體系的重量:體積配比為80-150g:1L，所述第一補料培養基中氮源與初始發酵體系的重量:體積配比為2-6g:1L；和/或，

在步驟(3)中，所述第二補料培養基中碳源與初始發酵體系的重量:體積配比為50-80g:1L，所述第二補料培養基中氮源與初始發酵體系的重量:體積配比為0.1-2g:1L；和/或，

在步驟(4)中，所述第三補料培養基中碳源與初始發酵體系的重量:體積配比為80-150g:1L。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述鹽單胞菌為Halomonas TD 01或HalomonasTD40。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述聚羥基脂肪酸酯為聚3羥基丁酸酯即PHB、聚3羥基丁酸4羥基丁酸酯即P3HB4HB或聚3羥基丁酸3羥基戊酸酯即PHBV。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，在步驟(1)中發酵的初始溫度為20℃-45℃；和/或，發酵體系的初始pH為7.0-11.0；和/或，發酵體系的初始溶氧為30％-60％。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，在步驟(1)中發酵的初始溫度為25℃-45℃；和/或，發酵體系的初始pH為7.0-10.0；和/或，發酵體系的初始溶氧為30％-60％。

6.根據權利要求5所述的方法，其中，在步驟(1)中發酵的初始溫度為30℃-40℃；和/或，發酵體系的初始pH為7.0-9.0；和/或，發酵體系的初始溶氧為30％-60％。

7.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(1)中的發酵培養時間為4-12h；和/或，所述步驟(2)中的發酵培養時間為4h-24h；和/或，所述步驟(3)中的發酵培養時間為2h-12h；和/或，所述步驟(4)中的發酵培養時間為2h-30h。

8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述步驟(1)中的發酵培養時間為6-10h；和/或，所述步驟(2)中的發酵培養時間為6h-20h；和/或，所述步驟(3)中的發酵培養時間為4h-12h；和/或，所述步驟(4)中的發酵培養時間為4h-24h。

9.根據權利要求1所述的方法，其中，在步驟(2)至(4)中，所述第一至第三補料培養基的碳源為選自葡萄糖、蔗糖、葡萄糖酸鈉中的一種或多種；和/或，在步驟(2)和(3)中，所述第一和第二補料培養基的氮源為選自氯化銨、硫酸銨、硝酸銨、尿素中的一種或多種。

10.根據權利要求1所述的方法，其中，在步驟(2)至(4)中，所述碳源或氮源的補加方式為連續流加補料或間歇補料；并且

在上述步驟(2)至(4)中，所述碳源或氮源的補料方式為選自混合補加、分開補加、相同速率補加、不同速率補加中的一種或多種。

11.根據權利要求1所述的方法，其中，在步驟(2)至(4)中，補料過程控制糖濃度為5-20g/L。