[發(fā)明專(zhuān)利]用于鑒定豌豆品種和純度的核心SSR引物及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710831156.8
• 申請(qǐng)日: 2017-09-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107574257B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宗緒曉;張紅巖;楊濤;劉榮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12Q1/686
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發(fā)明公開(kāi)了12對(duì)用于鑒定豌豆品種和純度的核心SSR引物，分別為引物PEA?1～PEA?12，引物序列如SEQ ID NO:1?24所示。利用本發(fā)明的12對(duì)核心SSR引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并結(jié)合熒光PCR毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)，可在短時(shí)間內(nèi)完成豌豆品種純度鑒定工作，具有高效、準(zhǔn)確、方便、鑒定結(jié)果不易受環(huán)境影響等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明可以從DNA水平對(duì)豌豆品種純度進(jìn)行有效監(jiān)控、保護(hù)作物品種，防止假冒偽劣品種進(jìn)入市場(chǎng)，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和作物育種技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及用于鑒定豌豆品種和純度的核心SSR引物及試劑盒。

背景技術(shù)

豌豆是世界上第四大食用豆類(lèi)作物，也是我國(guó)主要的雜糧作物之一。豌豆具有高蛋白質(zhì)含量、維生素豐富、易消化吸收，糧、菜、飼、肥兼用等諸多特點(diǎn)。豌豆種子質(zhì)量直接影響產(chǎn)量，豌豆種子純度是衡量種子質(zhì)量好壞的重要指標(biāo)。隨著我國(guó)種業(yè)市場(chǎng)的不斷壯大，市場(chǎng)上出現(xiàn)了一些以次充好、摻假造假等違規(guī)現(xiàn)象，嚴(yán)重影響了種植戶的利益和種業(yè)市場(chǎng)的健康發(fā)展。因此，建立一套高效、精準(zhǔn)、高通量、自動(dòng)化的豌豆品種純度檢測(cè)體系顯得尤為重要。

目前我國(guó)對(duì)豌豆品種純度鑒定主要依據(jù)NY/T 2436-2013《植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南豌豆》，該方法簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)，但受限于許多形態(tài)學(xué)性狀鑒定周期長(zhǎng)、易受環(huán)境影響等因素。近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，DNA分子標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)成為鑒定作物品種純度、解決品種爭(zhēng)議和新品種授權(quán)和保護(hù)的重要依據(jù)，也是促進(jìn)農(nóng)作物產(chǎn)業(yè)體系健康發(fā)展的有效手段。簡(jiǎn)單重復(fù)序列(Simple sequence repeat，SSR)，是第二代基于PCR技術(shù)的分子標(biāo)記技術(shù)，具有多態(tài)性豐富、遺傳信息多、操作便利、共顯性、高度可重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于植物資源遺傳研究和分子輔助育種實(shí)踐中。SSR分子標(biāo)記能夠從DNA水平上鑒定出品種間或品種內(nèi)的遺傳差異，在品種純度及真實(shí)性鑒定、種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化、品種審定及產(chǎn)權(quán)登記保護(hù)、品種糾紛等方面具有重要應(yīng)用價(jià)值。

豌豆品種科豌6號(hào)是遼寧省經(jīng)濟(jì)作物研究所于2005年以韓國(guó)超級(jí)甜豌豆為母本，遼豌4號(hào)為父本定向篩選育成，具有早熟、優(yōu)質(zhì)和增產(chǎn)優(yōu)勢(shì)顯著等特點(diǎn)。豌豆品種中秦1號(hào)是中國(guó)農(nóng)科院農(nóng)作物研究所與秦皇島市經(jīng)濟(jì)作物管理總站合作，于2011年以豌豆種質(zhì)資源“早綠”為親本，經(jīng)EMS化學(xué)誘變處理，定向篩選育成，具有抗逆性強(qiáng)、早熟、高產(chǎn)、食味鮮美，尤適菜用等特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供用于鑒定豌豆品種和純度的核心SSR引物及試劑盒。

本發(fā)明的另一目的是提供上述核心SSR引物及試劑盒在快速鑒定豌豆品種和純度中的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供的用于鑒定豌豆品種和純度的核心SSR引物，包括12對(duì)核心SSR引物，分別對(duì)應(yīng)于表1中PEA-1～PEA-12，引物信息如下(SEQ ID NO:1-24)：

表1 12對(duì)核心SSR引物信息

本發(fā)明還提供含有所述12對(duì)核心SSR引物的檢測(cè)試劑或試劑盒。

本發(fā)明還提供一種鑒定豌豆品種的方法，利用上述核心SSR引物，或檢測(cè)試劑或試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

所述方法包括以下步驟：

1)提取待測(cè)豌豆的基因組DNA；

2)以提取的DNA為模板，分別利用每對(duì)核心SSR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

3)分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

前述的方法，進(jìn)行PCR擴(kuò)增前，還包括對(duì)每對(duì)核心SSR引物進(jìn)行熒光標(biāo)記的步驟，例如，在引物對(duì)PEA-1～PEA-5、PEA-7的上游引物5′端標(biāo)記FAM熒光基團(tuán)，在PEA-8～PEA-12、PEA-6的上游引物5′端標(biāo)記HEX熒光基團(tuán)。