[發明專利]一種含復合免疫佐劑的脂質體制劑

在審

• 申請號: 201710826984.2
• 申請日: 2017-09-14
• 公開（公告）號: CN109498805A
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發明（設計）人: 鄭彬彬;陸偉
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/00;A61P37/04;A61P35/00
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發明屬藥物制劑領域，涉及一種含復合免疫佐劑的脂質體制劑為集多種免疫佐劑分子于一體的脂質體制劑。該制劑以脂質體作為免疫佐劑的載體，脂質體內部包載核酸納米粒佐劑，脂質體的磷脂雙分子層載有脂溶性小分子佐劑，脂質體的表面與鞭毛蛋白佐劑共價連接；以該脂質體制劑為佐劑進行抗腫瘤免疫，能提高刺激天然免疫應答的能力，增強抗原誘導產生特異性免疫反應，更有效地提高機體對腫瘤細胞的免疫殺傷能力和免疫預防能力以及降低對機體的毒副作用。

技術領域

本發明屬藥物制劑領域，涉及一種含復合免疫佐劑的脂質體制劑，具體涉及一種集多種免疫佐劑分子于一體的脂質體制劑。該制劑以脂質體作為免疫佐劑的載體，脂質體內部包載核酸納米粒佐劑，脂質體的磷脂雙分子層載有脂溶性小分子佐劑，脂質體的表面與鞭毛蛋白佐劑共價連接。該脂質體制劑可為佐劑進行抗腫瘤免疫，能有效提高機體對腫瘤細胞的免疫殺傷能力和免疫預防能力，降低對機體的毒副作用。

背景技術

據報道，十九世紀末，美國外科醫生威廉·科利便發現部分患有惡性肉瘤的病人在同時感染丹毒后會出現腫瘤消退的現象，隨后用活的丹毒致病菌鏈球菌和滅活過的鏈球菌及靈桿菌對腫瘤病人進行多次注射，發現伴隨著嚴重的高燒、寒顫等細菌感染癥狀，部分病人的腫瘤出現萎縮，這一探索開啟了利用細菌進行腫瘤治療的先河。通常業內認為細菌治療的作用原理在于接種的細菌或代謝產物在機體內引起強烈的急性炎癥反應，被充分活化的免疫系統在清除細菌的同時也對腫瘤細胞進行殺傷作用。隨著腫瘤細胞死亡并暴露自身抗原，免疫系統產生針對腫瘤的特異性抗體和淋巴細胞，并習得對腫瘤抗原的記憶性，從而讓機體獲得了抗腫瘤的免疫保護。細菌在這一過程中主要是作為免疫刺激佐劑起到活化免疫系統的作用。然而這一治療方法由于副反應作用嚴重，治療結果可重現性差，并沒有獲得美國食品藥品管理局的批準通過。

受此療法原理的啟發，有關研究人員在此基礎上進一步發展利用細菌的免疫抗腫瘤療法。一方面，選擇原本或經過減毒改造后毒性較低的菌株進行感染，以期降低細菌佐劑的毒性，例如使用諾維氏梭狀芽胞桿菌孢子接種至腫瘤部分，利用細菌的低毒性和厭氧性，使細菌集中在腫瘤深處的壞死低氧區，有效降低了細菌感染造成的風險，其中，最成功的應用當屬卡介苗灌注法治療非肌層浸潤性膀胱癌，它已成為防止此類膀胱癌手術切除后復發的最佳手段；另一方面，為了杜絕潛在的感染風險，對細菌進行滅活處理或者用細菌的提取物，做成合適的制劑，例如將熱滅活的結核桿菌加入到石蠟和羊毛脂中作為完全弗氏佐劑，能夠與溶有抗原的水相等體積震蕩混勻形成乳劑，在體內緩慢釋放抗原和佐劑；弗氏佐劑已成為動物免疫中誘導體液免疫和細胞免疫的標準免疫佐劑。

研究表明，活細菌佐劑免疫效果較強，但細菌本身即便經過改造仍有一定活力，當接種到免疫力較弱的個體時，存在發生感染，其潛在的突變可能導致毒性的恢復等風險。滅活菌及其衍生物雖然沒有感染的風險，但仍無法避免局部造成的過強毒性刺激，且本身免疫效果較弱，保護期短，通常需要多次加強免疫。與此同時，源于細菌及其代謝產物得到的佐劑，其組成成分并不明確，潛在的毒性風險難以掌控，批次間的質量可控性也較差。

為了克服傳統細菌佐劑的不足，需要擺脫對細菌本身的依賴，開發出人工全合成的高效安全免疫佐劑。在對天然免疫的研究中，人們發現Toll樣受體(TLR)家族以及NOD受體家族在免疫細胞(如抗原呈遞細胞)檢測外界病原入侵發揮重要作用，這些受體能夠分別與來自病原體的不同組成成分相結合，并將這些危險信號傳遞至下游的核轉錄因子，促使免疫細胞活化反應；其對應的配體也被一一發現，其中TLR4對應的配體單磷酰脂質A和NOD2對應的配體米伐木肽來自于細菌的細胞壁，TLR5對應的配體鞭毛蛋白來自于細菌表面的鞭毛，TLR9對應的配體胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸序列來自于細菌的基因組，四者的化學結構明確，均能在體外合成，并已被證實具有一定的免疫刺激能力，能夠作為佐劑協同促進抗原在體內的免疫原性。