[發明專利]一種適用于提取楊樹干種子mRNA提取液配方及其用法

在審

• 申請號: 201710825845.8
• 申請日: 2017-09-14
• 公開（公告）號: CN109504674A
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發明（設計）人: 曲春浦;許志茹;楊成君;胡彥波;劉關君
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于植物分子生物學領域，涉及一種適用于楊樹干種子核酸提取的提取液配方及使用方法。其特征是由以下成分及其含量組成(A組分和B組分)：100ml A組分由以下部分組成：丙酮40ml，甘油10ml，0.5M NaAc 40ml，1mM乙二胺四乙酸二鈉10ml；100ml B組分由以下部分組成：鹽酸胍35ml，2.5M NaCl20ml，0.5mM乙二胺四乙酸二鈉5ml，苯酚10ml，2mM Tris?cl(PH＝8)30ml。本發明能夠從多年儲藏的楊樹干種子中提取完整的mRNA，同時本發明對提取煙草及擬南芥等植物干種子mRNA的提取也有很好的效果。

技術領域：

本發明屬于植物分子生物學領域，涉及一種適用于提取楊樹干種子mRNA的提取液配方。

背景技術：

楊樹屬于被子植物門(Angiosperms)雙子葉植物綱(Dicots)楊柳科(Salicaceae)楊屬(Populus)，為落葉喬木。我國原產楊樹近60種，除熱帶外幾乎皆有分布，是主要綠化造林樹種，并具有很大的工業用途和一定的藥用價值。且由于楊樹基因組已成功測序，基因背景清晰，已成為林木科研領域最重要的模式樹種之一。

作為林木領域的模式樹種，其種子發育過程同樣受到人們的關注，但干的楊樹種子中脂類、蛋白以及淀粉的大量存在對傳統提取mRNA的方法形成了巨大的挑戰，并且在現有文獻中并無解決該困難的報道。故對干的楊樹種子中提取mRNA的方法亟待解決。

發明內容：

本發明目的是在于提供提取楊樹干種子中mRNA的配方，通過此方法可以快速而高效的提取已儲存多年的楊樹干種子中的mRNA，以供科研需要，在其他種子如擬南芥和煙草等物種中，該方法同樣有效。

說明書附圖

表1不同年份楊樹干種子mRNA提取總濃度變化。

表2不同年份楊樹干種子mRNA提取樣本中的230，260，280和320nm波長吸光光度值。

圖1不同年份楊樹干種子mRNA提取樣本電泳圖。

圖2煙草和擬南芥干種子mRNA電泳圖。

具體實施方式：

1.干種子mRNA提取液配方如下：A組分：100ml A組分由以下部分組成：丙酮40ml，甘油10ml，0.5M NaAc 40ml，1mM乙二胺四乙酸二鈉10ml，100ml B組分由以下部分組成：鹽酸胍35ml，2.5M NaCl 20ml， 0.5mM乙二胺四乙酸二鈉5ml，苯酚10ml，2mM Tris-cl(PH＝8)30ml。

2.其使用方法如下：將干的楊樹種子放入研缽中，倒入液氮研磨至完全粉狀樣，將粉狀物加入至1.5ml 離心管中，加入A組分1ml,-20℃靜止30min，之后用移液器小心地將上清液吸出，加入0.75mlB組分， 55℃水浴加熱15min，取出后加入0.5ml氯仿震蕩15min。12000rpm離心5min。

3.將上清小心轉移至另一離心管中，加入等體積氯仿進行震蕩。

4.4℃13000rpm離心8min，取上清。重復一次上述步驟。

5.上清加入用1/10體積NaAc和二倍體積無水乙醇沉淀15min，13000rpm離心10min。75％酒精洗兩次, 溶于30ul的水(DEPC水)中。

6.檢測提取結果。

實施效果：

⑴通過分光光度法對mRNA含量進行檢測。結果表明，不同年份楊樹干種子mRNA提取總濃度無顯著差異，說明該方法對提取儲存多年的楊樹種子mRNA的效率基本一致(表1)。