[發明專利]一種酶交聯水凝膠的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201710822630.0
• 申請日: 2017-09-13
• 公開（公告）號: CN107686557A
• 公開（公告）日: 2018-02-13
• 發明（設計）人: 曹一平;鄭志強;張瑋瑩;陳勇
• 申請（專利權）人: 江漢大學
• 主分類號: C08J3/24
• 分類號: C08J3/24;C08J3/075;C08L5/08;C08B37/08;A61L27/20;A61L27/52;C12N5/10;C12P19/26
• 代理公司: 北京華沛德權律師事務所11302
• 代理人: 房德權

1.一種酶交聯水凝膠的制備方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：將CS-C分別溶于0.06wt％的H₂O₂溶液及0.004wt％的HRP酶溶液中，得到1.5-1.8wt％的CS-C的H₂O₂溶液和CS-C的HRP酶溶液；分別將所述CS-C的H₂O₂溶液和CS-C的HRP酶溶液加入到Y型注射器中進行混合注射，在凝膠模具中形成凝膠。

2.根據權利要求1所述的酶交聯水凝膠的制備方法，其特征在于：所述凝膠模具為底部鋸掉的EP管，形成凝膠的時間為150s。

3.根據權利要求1所述的酶交聯水凝膠的制備方法，其特征在于：所述CS-C的制備方法包括：

1)將CS溶解于酸液中，攪拌得到CS溶液；調節所述CS溶液至pH＝5.0后，再將CHA加入到所述CS溶液中，CHA和CS的摩爾比為0.8～1，攪拌至澄清，得到溶液A；

2)將EDC溶解于第一溶劑中，得到溶液，將所述溶液逐滴加入到溶液A中，攪拌，使其充分混合；EDC和CHA的摩爾比為1-2，偶聯反應12-24h，并保持pH＝5，溫度37℃；反應結束后，透析除去反應物質及副產物，凍干得到CS-C。

4.根據權利要求3所述的酶交聯水凝膠的制備方法，其特征在于：所述步驟1)中，所述酸液為pH＝1～2的HCl溶液，所述攪拌時間為4-6h。

5.根據權利要求3所述的酶交聯水凝膠的制備方法，其特征在于：所述步驟2)中，所述第一溶劑為乙醇。

6.根據權利要求3所述的酶交聯水凝膠的制備方法，其特征在于：所述步驟2)中，控制滴加的速率為以1滴/秒。

7.根據權利要求3所述的酶交聯水凝膠的制備方法，其特征在于：所述步驟2)中，所述透析包括：依次置于含有1wt％的NaCl、pH＝5.0的HCl溶液和去離子水中透析。

8.如權利要求1-7任一項所述方法制備的酶交聯水凝膠的應用，其特征在于：所述水凝膠可負載人誘導多能干細胞。

9.根據權利要求8所述的酶交聯水凝膠的應用，其特征在于：所述水凝膠負載人誘導多能干細胞的方法包括：將15-18mg的CS-C分別溶于1mL 0.06wt％的H₂O₂溶液及1mL 0.004wt％的HRP酶溶液中，得到CS-C的H₂O₂溶液和CS-C的HRP酶溶液；將所述CS-C的H₂O₂溶液和CS-C的HRP酶溶液預混，得到預混液；在預混液未完全凝膠之前，加入0.2～0.3mL iPSC、4×10⁶個/mL的細胞懸液到所述預混液中，輕柔混合均勻后，在37℃，5％CO₂培養箱中培養3天。