[發明專利]一種具有3個最適pH的耐鹽耐乙醇果膠酶及其基因

有效

• 申請號: 201710822387.2
• 申請日: 2017-09-13
• 公開（公告）號: CN107446903B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 周峻沛;黃遵錫;張蕊;李娜;唐湘華;李俊俊;吳倩
• 申請（專利權）人: 云南師范大學
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N9/88;C12N9/24;C12N15/56;C12N15/60;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發明屬于生物酶技術領域，公開了一種具有3個最適pH的耐鹽耐乙醇果膠酶及其基因，果膠酶PetSbs具有SEQ ID NO.1的氨基酸序列，編碼基因petSbs具有SEQ ID NO.2的核苷酸序列。本發明提供了包含petSbs的重組載體，該重組載體為重組質粒。本發明提供了包含重組載體的宿主細胞，重組載體轉化宿主細胞得到重組菌株。本發明的果膠酶PetSbs最適pH值為5.0、7.0和7.5，具有耐鹽和耐乙醇的性質，可應用于紡織、造紙、食品等行業。

技術領域

本發明屬于生物酶技術領域，尤其涉及一種具有3個最適pH的耐鹽耐乙醇果膠酶及其基因。

背景技術

果膠主要由D-半乳糖醛酸以α-1,4-糖苷鍵聚合而成，廣泛存在于陸生植物的細胞壁中，最高可占細胞壁干重的三分之一，是植物細胞組織的“粘合劑”。果膠酶可將果膠降解為半乳糖醛酸低聚糖或半乳糖醛酸，在紡織、造紙、廢水處理、食品、生物技術、飼料等方面應用廣泛(Zhou et al.,Biotechnology and Bioprocess Engineering,2012,17:729–738)。

大部分的酶都只有1個最適pH，而只有很少的酶具有多個最適pH，如來源于曲霉的類群1植酸酶和一些β-葡聚糖酶(Zhou et al.,Food Chemistry,2016,194:156–166)。由于不同的應用環境中pH值常常具有較大差異，所以具有多個最適pH的酶將具有更廣泛的用途。

耐鹽酶在需要高鹽濃度的行業中具有重要的應用價值，如高鹽稀態醬油發酵；高鹽條件下的發酵可以省略滅菌步驟，降低能耗。但是，由于鹽析、金屬離子抑制催化氨基酸及底物結合氨基酸等作用，大部分的酶不具有良好的耐鹽性。

耐乙醇的酶在利用同步糖化發酵法生產乙醇中具有優勢，可提高乙醇產量和生物質利用率、縮短發酵時間，但乙醇會破壞酶中原有的氫鍵，是常用的蛋白變性劑。因此，大部分的酶不具有良好的耐乙醇性。

綜上所述，現有技術存在的問題是：現有的果膠酶不具有多個最適pH，不同時具有良好的耐鹽性和耐乙醇性。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種具有3個最適pH的耐鹽耐乙醇果膠酶PetSbs及其基因，同時提供了果膠酶PetSbs的制備方法。

本發明的目的在于提供一種果膠酶PetSbs，所述果膠酶PetSbs的氨基酸序列為SEQ ID NO.1。經BLAST比對，果膠酶PetSbs與GenBank中Parapedobacter indicus來源的蛋白(WP_090625786)具有最高的氨基酸序列一致性，為45.3％。說明果膠酶PetSbs是一種新的果膠酶。

本發明的另一目的在于提供一種所述果膠酶PetSbs的編碼基因petSbs，所述編碼基因petSbs的核苷酸序列為SEQ ID NO.2。

本發明的另一目的在于提供一種包含所述編碼基因petSbs的重組載體，所述重組載體由具有SEQ ID NO.2核苷酸序列的基因片段與表達載體重組構建而成。

本發明的另一目的在于提供一種包含所述重組載體的重組菌株。

本發明的另一目的在于提供一種所述果膠酶PetSbs的制備方法，所述果膠酶PetSbs的制備方法包括：

用重組載體轉化宿主細胞，得重組菌株；

培養重組菌株，誘導重組果膠酶PetSbs表達，得到果膠酶PetSbs。