[發(fā)明專利]分析物濃度的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710822233.3
• 申請日: 2017-09-13
• 公開（公告）號: CN109307768B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 莊漢聲;陳韋龍
• 申請（專利權(quán)）人: 莊漢聲
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 北京律誠同業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 徐金國

本發(fā)明的分析物濃度的檢測方法包含使第一復(fù)合體與標(biāo)準(zhǔn)分析物或待測分析物進(jìn)行競爭反應(yīng)，以使第一復(fù)合體與金屬納米粒子結(jié)合并分別形成控制組的第二復(fù)合體和待測組的第三復(fù)合體。利用第二復(fù)合體和第三復(fù)合體的熱擴(kuò)散度差異，可判斷待測組的待測分析物濃度高于或低于控制組的標(biāo)準(zhǔn)分析物濃度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是有關(guān)于一種分析物濃度的檢測方法，且特別是有關(guān)于一種利用二分法和粒子在溶液中的熱擴(kuò)散度，來判斷分析物濃度高于或低于標(biāo)準(zhǔn)值的檢測方法。

背景技術(shù)

隨醫(yī)學(xué)日漸進(jìn)步，非侵入式的疾病檢測發(fā)展逐漸成為研發(fā)重點。舉例而言，在糖尿病的視網(wǎng)膜病變的檢測中，常見的非侵入式疾病檢測可例如為眼部斷層掃描，但無論是儀器或是檢測費用都十分昂貴。另一種檢測方式為熒光血管照影，然需在靜脈施打熒光染劑，屬于侵入式的檢測方式。針對上述問題，應(yīng)發(fā)展出可快速篩檢、價格便宜且非侵入式的檢測方法。

目前有一種方法是將抗原標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)記熒光，并將上述抗原對應(yīng)的抗體接附于載體上(后稱抗體載體)。之后，將待測抗原樣品、抗原標(biāo)準(zhǔn)品及抗體載體混合，使待測抗原樣品與抗原標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行競爭反應(yīng)，以與抗體載體結(jié)合。之后，利用抗原標(biāo)準(zhǔn)品上的熒光標(biāo)記觀測其布朗運動的情形。自由態(tài)的抗原標(biāo)準(zhǔn)品越多代表待測樣品濃度越高，從而可得知待測抗原樣品濃度的高低。然而，此習(xí)知方法的缺點在于，將待測抗原樣品與抗原標(biāo)準(zhǔn)品混合的方法，使得同一抗原標(biāo)準(zhǔn)品無法重復(fù)使用來檢測多組待測抗原樣品，增加檢測成本。此外，此習(xí)知方法也可能增加樣品污染的風(fēng)險。

另一種方法是利用接附有對應(yīng)待測分析物的第一結(jié)合配偶體的至少二種大小不同且具有特定尺寸比的第一粒子，來增加可偵測的濃度動態(tài)范圍(Dynamic range)。具體而言，將大的第一粒子、小的第一粒子，及具有標(biāo)記和可與上述第一結(jié)合配偶體接合的第二結(jié)合配偶體的第二粒子，同時加入具有待測分析物的樣品溶液中。接著，第二粒子與待測分析物進(jìn)行競爭反應(yīng)，以與大的第一粒子或小的第一粒子接合。藉由大/小第一粒子和第二粒子的接合信息的大小，判斷待測分析物的濃度。然而，上述方法要判斷出分析物的濃度，至少需在待測樣品中額外加入至少三種粒子，增加檢測復(fù)雜性。此外，此習(xí)知方法對于大/小第一粒子的尺寸限制極為嚴(yán)格，造成應(yīng)用上的限制。

尚有另一種方法是在納米粒子的表面上接上抗體，以形成抗體摻雜。然后，將抗體摻雜加入含抗原的待測溶液中。之后，檢測待測溶液中抗體和抗原結(jié)合后，納米粒子布朗運動效應(yīng)的改變量，并根據(jù)事前利用標(biāo)準(zhǔn)品所制作的檢量線推算所檢測的抗原濃度。然而，此方法須使用檢量線，故當(dāng)待測樣品未落于檢量線的范圍時，或是更換待測樣品種類時，則需要更多的準(zhǔn)備工作來完成分析物濃度的檢測，也使可偵測的最低濃度受到限制(即偵測靈敏度不佳)。因此，上述方法也不適用于疾病的快速篩檢上。再者，為增加抗體接上納米粒子后所產(chǎn)生的相對體積差異(影響布朗運動變化量)，此習(xí)知方法所使用的納米粒子的粒徑較小，制備較困難，且可偵測的濃度動態(tài)范圍小。

因此，目前亟需提出一種分析物濃度的檢測方法，其可具有良好的靈敏度、低偵測極限、廣動態(tài)范圍、操作簡易且快速、再現(xiàn)性高的優(yōu)點，以克服上述種種問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個方面在于提供一種分析物濃度的檢測方法。在一實施例中，上述檢測方法包含下述步驟。首先，提供至少二反應(yīng)溶液，至少二反應(yīng)溶液的每一者包含第一復(fù)合體，且第一復(fù)合體包含標(biāo)記粒子、固定于標(biāo)記粒子表面的結(jié)合配偶體以及與結(jié)合配偶體結(jié)合的受質(zhì)。接下來，于上述至少二反應(yīng)溶液的一者中，同時加入標(biāo)準(zhǔn)分析物以及金屬納米粒子，以形成第二復(fù)合體，其中金屬納米粒子具有上述的結(jié)合配偶體，且標(biāo)準(zhǔn)分析物在至少二反應(yīng)溶液的一者中具有已知濃度。然后，于上述至少二反應(yīng)溶液的另一者中，同時加入包含待測分析物的樣本以及上述金屬納米粒子，以形成第三復(fù)合體，其中待測分析物于上述反應(yīng)溶液的另一者中具有待測濃度，標(biāo)記粒子的等效粒徑大于金屬納米粒子的等效粒徑，且受質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)分析物以及待測分析物實質(zhì)為相同物質(zhì)。然后，利用光源檢測第二復(fù)合體的第一熱擴(kuò)散度以及第三復(fù)合體的第二熱擴(kuò)散度。接著，進(jìn)行判斷分析物濃度的步驟，其中當(dāng)?shù)谝粺釘U(kuò)散度小于第二熱擴(kuò)散度時，判斷待測濃度大于已知濃度，或是當(dāng)?shù)谝粺釘U(kuò)散度大于第二熱擴(kuò)散度時，判斷待測濃度小于已知濃度。