[發明專利]一種激素誘導密刺苦草工程苗的快繁方法

在審

• 申請號: 201710820368.6
• 申請日: 2017-09-13
• 公開（公告）號: CN107333658A
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 高海龍;詹茂華;程寒飛;朱林;黃建
• 申請（專利權）人: 中冶華天工程技術有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 馬鞍山市金橋專利代理有限公司34111
• 代理人: 唐宗才

技術領域

本發明涉及一種沉水植物培育領域，尤其涉及一種激素誘導密刺苦草工程苗的快繁方法。

背景技術

目前我國湖泊河流污染嚴重，大多數水體呈現富營養化或正在富營養化。富營養化帶來的最嚴重的后果之一為浮游植物大量增殖，水生植物尤其是沉水植物大量消亡。沉水植物作為湖泊生態系統的一個重要組成部分和主要的初級生產者之一，其對湖泊生態系統的物質和能量的循環起著重要作用，對水體營養系統具有重要的調節作用，特別是沉水植物占據了湖泊中的水和沉積物的主要界面，對湖泊生產力及湖泊生態系統具有非常重要的影響。因此恢復沉水植物被認為是治理富營養化水體的有效和關鍵手段。

密刺苦草為多年生沉水草本植物，能夠越冬，且該物種對水位和底質適應性強，適宜作為湖泊生態修復的建群種。目前市場上對密刺苦草種苗的需求量很大，在生態修復工程和試驗研究中都有應用，但種源大多來自自然環境。一方面，大量打撈容易導致原產地生境的破壞；另一方面，自然生境的密刺苦草常帶有各種各樣的微生物，容易造成移植生境的污染和有關生理生態試驗的誤差。綜上，亟需開發相關的快繁技術為生態修復工程和試驗研究以提供穩定優質的工程苗。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種激素誘導密刺苦草工程苗的快繁方法，可以在短期內建立較大規模的群落，修復富營養化水體。

本發明的技術方案如下：

本發明一種激素誘導密刺苦草工程苗的快繁方法，包括如下步驟：

1)外植體的消毒

采集生長良好、健壯的密刺苦草植株，用清水清洗3～4遍，清除密刺苦草表面附著物，將密刺苦草葉子去除；然后對密刺苦草根莖段消毒，最后截取0.5～1.0cm帶節間的根莖段；

2)出芽誘導

將消毒后的密刺苦草根莖段移入添加了0.5～2mg/L 6-BA和0.1mg/L NAA和2.0％蔗糖和8mg/L瓊脂的MS培養基，設置溫度20～25℃，光照強度1500～3000Lux，光照12h/d，培養10～15天，誘導生芽；

每升MS培養基含：硝酸銨1650mg，硝酸鉀1900mg，氯化鈣440mg，硫酸鎂370mg，磷酸二氫鉀170mg，碘化鉀0.83mg，硼酸6.2mg，硫酸鎂22.3mg，硫酸鋅8.6mg，鉬酸鈉0.25mg，硫酸銅0.025mg，氯化鈷0.025mg，硫酸亞鐵27.8mg，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg，肌醇100mg，煙酸0.5mg，鹽酸吡哆醇0.5mg，鹽酸硫胺素0.1mg，甘氨酸2.0mg；

3)增殖培養

將經步驟2)得到的培養物接入分化與增殖培養基中培養20～25天，設置溫度20～25℃，光照強度1500～3000Lux，光照12h/d，以獲得更多的密刺苦草的芽；分化與增殖培養基為每升MS培養基中含有1.0mg 6-BA和0.1mg NAA和2.0％蔗糖和8mg瓊脂；

4)生根培養

將步驟3)獲得的密刺苦草芽轉接于生根培養液中誘導生根，設置溫度20～25℃，光照強度1500～3000Lux，光照12h/d，培養10～15天即可得到密刺苦草苗，生根培養液為添加了0.5～1mg/L IBA和0.1mg/L 6-BA和2.0％蔗糖和5mg/L瓊脂的霍格蘭營養液；

霍格蘭營養液的配方：

每升營養液中含：四水硝酸鈣945mg、硝酸銨80mg、磷酸二氫鉀136mg、硫酸鎂493mg，七水硫酸亞鐵2.78g，乙二胺四乙酸二鈉3.73g；微量元素：碘化鉀0.00415mg，硼酸0.031mg，硫酸錳0.1115mg，硫酸鋅0.043mg，鉬酸鈉0.00125mg，硫酸銅0.000125mg，氯化鈷0.000125mg；

5)煉苗

將步驟4)獲得的密刺苦草苗移栽到底部鋪有經過滅菌的沙石的玻璃培養缽；保持水深20～30cm，每7～10天換水并添加一定量霍格蘭營養液以促進其生長；當室外白晝氣溫18℃以上時，將玻璃培養缽置于室外，直接利用自然太陽光照；否則，將玻璃缸置于溫室中，晝夜溫度分別保持18℃和25℃以上，并在白天適當補充人工光照。

6)移栽

上述培養保持到密刺苦草植株長至25cm以上即可移栽到待修復水體。

進一步地，所述的步驟1)中密刺苦草根莖段消毒過程為先用70～75％的酒精浸泡5～10分鐘，然后用9～10％的次氯酸鈉溶液浸泡5～30分鐘，最后用無菌水沖洗4～5次，每次2～3分鐘。