[發明專利]一種同型半胱氨酸檢測試劑盒的防腐方法

在審

• 申請號: 201710817260.1
• 申請日: 2017-09-12
• 公開（公告）號: CN107703305A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 華權高;龔婷;徐春雷
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙)42231
• 代理人: 黃君軍

技術領域

本發明屬于生化診斷試劑制備領域，具體涉及一種同型半胱氨酸檢測試劑盒的防腐方法。

背景技術

氧化型同型半胱氨酸(HCY)被轉化成游離HCY，游離HCY在胱硫醚β-合成酶(CBS)催化下和絲氨酸反應生成L-胱硫醚；L-胱硫醚在胱硫醚β-分解酶(CBL)催化下又生成HCY、丙酮酸和NH₃。該循環反應生成的丙酮酸可以用乳酸脫氫酶LDH和NADH檢測到，NADH轉變成NAD的速率與樣品中HCY含量成正比。

同型半胱氨酸測定試劑盒采用循環酶法的方法學來測定血清中的同型半胱氨酸含量，該試劑盒具有快速精準的特點。由于試劑成分中L-絲氨酸濃度只有0.04g/L，濃度比較低，L-絲氨酸這個參加反應的底物加入到試劑溶液后如果配制過程中感染細菌，L-絲氨酸就會成為細菌和霉菌的培養基，試劑可能會有大面積長菌的危險，因而限制了同型半胱氨酸測定試劑盒的穩定性，而試劑的穩定性直接關系到試劑的質量，這也是試劑立足于市場經濟的根本條件。同時，由于目前使用的試劑盒組分復雜，再添加防腐劑后對測值有一定的影響。

現有技術中，對于半胱氨酸檢測試劑盒的防腐常用的藥劑為疊氮鈉，如中國專利“一種穩定的同型半胱氨酸檢測試劑盒”CN 104198726 B，但使用疊氮鈉防腐存在缺點是不能夠抑制霉菌在試劑盒中的生長和繁殖，霉菌的生長會造成試劑盒穩定性下降。因此，找到既能夠防止細菌和霉菌污染，又能夠保持測值的準確性的防腐劑，是一件很關鍵的問題。現有技術中二乙醇胺的作用為：在試劑盒制備中作為緩沖液成分和底物成分，如中國專利“蛋白質的測定方法與蛋白質檢測試劑盒”CN101477129A/“南芥菜花葉病毒的檢測方法及專用試劑盒”CN101893631A；但目前沒有將二乙醇胺作為同型半胱氨酸檢測試劑盒防腐劑的報道。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種同型半胱氨酸檢測試劑盒的防腐方法，向試劑中添加兩種防腐劑疊氮鈉和二乙醇胺，使試劑盒保持原來的測值穩定性，同時避免了霉菌和細菌對穩定性的影響。

發明人通過大量實驗和不懈努力，獲得了一種同型半胱氨酸檢測試劑盒的防腐方法，通過以下技術方案實現：根據同型半胱氨酸測定試劑盒(循環酶法)試劑中主要組成成份為R1：檢測試劑1(乳酸脫氫酶>35KU/L，絲氨酸為0.04g/L，NADH＞0.47mmol/L)；R2：檢測試劑2(胱硫醚β-合成酶(CBS)>2KU/L，胱硫醚β-分解酶(CBL)>10KU/L)配制出同型半胱氨酸測定試劑(循環酶法)，本發明的防腐方法在檢測試劑中加入0.5-5g/L疊氮鈉和0.5-5ml/L二乙醇胺，疊氮鈉優選的添加量為1g/L，二乙醇胺優選的添加量為1ml/L，有效防止細菌和霉菌污染試劑盒。

優選地，如上所述的一種同型半胱氨酸檢測試劑盒的防腐方法，疊氮鈉和二乙醇胺的添加量為各物質在試劑中的終濃度。

與現有技術相比，本發明的優點為：使用適量的二乙醇胺和疊氮鈉作為防腐劑，試劑盒能夠保持原來的測值穩定性，同時避免了霉菌和細菌對穩定性的影響；且二乙胺不僅能有效抑制霉菌的污染，而且能協同提高疊氮鈉對細菌的抑制效果。

具體實施方式

以下實施例僅是范例性的，僅用以對本發明的技術方案做更進一步的詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，在不偏離本發明技術方案的精神和范圍內，對技術方案進行的修改或者替換均應涵蓋在本發明的權利要求保護范圍內。

實施例1

根據同型半胱氨酸測定試劑盒(循環酶法)試劑中主要組成成份為R1：檢測試劑1(乳酸脫氫酶>35KU/L，絲氨酸為0.04g/L，NADH＞0.47mmol/L)；R2：檢測試劑2(胱硫醚β-合成酶(CBS)>2KU/L，胱硫醚β-分解酶(CBL)>10KU/L)配制出同型半胱氨酸測定試劑(循環酶法)，試劑分為七份：取一份不加入任何防腐劑的試劑，加入100微升的去離子水，并放于37℃烘箱中培養72個小時后取出試劑放置于HITACHI 7100生化儀中檢測。

實施例2