[發(fā)明專利]人全血中游離型及細(xì)胞結(jié)合型總IgE測定診斷試劑盒及制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710815315.5
• 申請(qǐng)日: 2017-09-15
• 公開（公告）號(hào): CN107621548A
• 公開（公告）日: 2018-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張軍方
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市因諾賽生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體是涉及一種全血中游離型及細(xì)胞結(jié)合型總IgE測定診斷試劑盒及制備方法。

背景技術(shù)

IgE分子是過敏性疾病發(fā)展中的關(guān)鍵分子，檢測IgE水平在過敏性疾病的診斷及治療評(píng)價(jià)中非常重要。近幾年來，隨著工業(yè)化進(jìn)程的加快發(fā)展，人類生活環(huán)境和生活方式的急速變化，過敏性疾病發(fā)病率不斷上升。根據(jù)2006年WHO 發(fā)表的過敏性疾病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示:在接受調(diào)查的30個(gè)國家和地區(qū)12 億總?cè)丝谥校薪?2％(25000萬人)患有IgE介導(dǎo)的過敏性疾病，如過敏性鼻炎、哮喘、結(jié)膜炎、濕疹、食物過敏、藥物過敏等。2005年世界衛(wèi)生組織 (WHO)的調(diào)查顯示全球約1.5億人罹患哮喘；據(jù)WAO發(fā)布的2011-2012年白皮書報(bào)道，這一數(shù)字已經(jīng)增至3億人，預(yù)計(jì)到2025年將增長到4億，2013年 WAO白皮書顯示每年約25萬人死于哮喘。過敏性疾病對(duì)社會(huì)的負(fù)面影響不僅給患者及其家庭和國家衛(wèi)生資源帶來了巨大的財(cái)務(wù)負(fù)擔(dān)和壓力，還帶來了更大的社會(huì)成本和人類生活質(zhì)量問題。因此，過敏性疾病己經(jīng)被WHO列為二十一世紀(jì)重點(diǎn)防治的三大疾病之一，是當(dāng)前世界性的重大衛(wèi)生學(xué)問題。

過敏性疾病是由IgE、肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞、過敏原和細(xì)胞因子等多種細(xì)胞和因子參與的炎癥性疾病。一般認(rèn)為，IgE分子是導(dǎo)致過敏性疾病的關(guān)鍵分子，IgE有兩種類型：一種是在B細(xì)胞膜表面經(jīng)過IgE同種型轉(zhuǎn)向的膜 IgE，另一種則是由漿細(xì)胞產(chǎn)生的游離IgE。IgE是γ糖蛋白，沉降系數(shù)為8S，分子量為190k Da，其耐熱性較差，56℃4h即失去結(jié)合能力。IgE在正常人血清中含量甚微(50～300ng/mL)，一般要用放射免疫分析法才能測出。IgE在血清中的含量波動(dòng)很大，在過敏性性疾病的患者血清中，IgE可上升十倍；在某些寄生蟲病、真菌感染和金黃色葡萄球菌感染后其濃度可增加到1000倍于正常值。IgE在血清中的半衰期只有2.5天，很難起到中和過敏原的作用，但由于IgE與嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞上的高親和力IgE Fc受體 FcεRⅠ具有很高的親和力，IgE的作用被明顯放大并可維持?jǐn)?shù)周至數(shù)月之久。 IgE為親細(xì)胞抗體，其Fc段特與嗜堿粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞表面的高親和力受體 FcεRⅠ結(jié)合，當(dāng)二價(jià)以上抗原與細(xì)胞上IgE結(jié)合，使IgE分子橋聯(lián)，在Ca2+ 存在下，即可觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)生物活性物質(zhì)釋放從而引發(fā)變態(tài)反應(yīng)。

IgE分子最重要的生物學(xué)功能是與具有相應(yīng)受體的靶細(xì)胞結(jié)合，使靶細(xì)胞致敏或發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和保護(hù)作用，它在變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵的介導(dǎo)作用。當(dāng)變應(yīng)原首次進(jìn)入機(jī)體后，誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞的IgM發(fā)生類別轉(zhuǎn)換成IgE。特異性B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體應(yīng)答，IgE陽性B淋巴細(xì)胞分泌游離IgE 到血液中，游離IgE與肥大細(xì)胞或者嗜堿性粒細(xì)胞表面的IgE高親和力受體 FcεRⅠ結(jié)合，此時(shí)機(jī)體處于致敏狀態(tài)。機(jī)體再次接觸變應(yīng)原后，過敏原與肥大細(xì)胞表面的過敏原特異性IgE進(jìn)行結(jié)合，導(dǎo)致肥大細(xì)胞的脫顆粒，釋放及合成大量過敏介質(zhì)(如組胺、白三烯和血小板激活因子等)，從而引起局部或者全身過敏反應(yīng)。

除與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的FcεRⅠ結(jié)合外，IgE還可與B細(xì)胞和單核細(xì)胞表達(dá)的FcεRⅡ結(jié)合，這有利于B細(xì)胞對(duì)變應(yīng)原的攝入、處理并提呈給 T淋巴細(xì)胞，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體對(duì)變應(yīng)原的免疫應(yīng)答。IgE是FcεRⅠ與FcεRⅡ的正向調(diào)節(jié)劑，抗IgE治療可減少嗜堿性粒細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞上的IgE受體數(shù)量。另外，在CD79的協(xié)同作用下，膜IgE還能激發(fā)B細(xì)胞增殖和分化。

IgE在過敏性疾病中起著重要作用，并且還是臨床治療過敏性疾病的重要靶點(diǎn)。中和血液中IgE的方法主要是特異性地結(jié)合并中和血清中游離的IgE，阻止IgE分子與靶細(xì)胞上IgE受體結(jié)合，從而抑制過敏原誘導(dǎo)的早/晚期超敏反應(yīng)。

目前檢測IgE僅能檢測血清中游離IgE，不能檢測結(jié)合在細(xì)胞上的IgE。一般采用雙抗體夾心法檢測血清中游離IgE，具體方法有放射免疫法、酶免疫分析和化學(xué)發(fā)光免疫分析，由于操作簡便、所需設(shè)備簡單，以酶免疫分析比較普及。其測定原理為：將針對(duì)IgE的兩種抗體，一種包被于微孔板，另一種標(biāo)記辣根過氧化酶(或者堿性磷酸酶)。先加入待測血清，血清中的IgE與固相表面的IgE抗體結(jié)合，然后洗滌未結(jié)合的物質(zhì)，再加入酶標(biāo)記的第二種IgE抗體，形成雙抗夾心復(fù)合物，最后加入酶的底物，通過顏色變化來檢測樣品中的 IgE濃度。