[發明專利]一種禽流感H9亞型病毒抗體快速定量檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201710814548.3
• 申請日: 2017-09-10
• 公開（公告）號: CN108051591A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 王喜亮;楊帆;畢丁仁
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

本發明屬于動物傳染病檢測技術領域，具體涉及一種禽流感H9亞型病毒抗體快速定量檢測試劑盒及其應用。本發明可對禽流感H9亞型病毒抗體進行實時、快速動態定量檢測，本發明的試劑盒由試紙條、測試卡殼和樣品稀釋液組成，所述的試紙條由樣品墊、吸收墊、涂覆有由保藏號為CCTCC M 2017470的大腸桿菌BL21/pSmart?H9?HA表達的HA蛋白?膠體金標記物、兔IgG－膠體金標記物的結合墊，包被有禽流感H9亞型抗原蛋白HA的第一檢測線和第二檢測線，包被有羊抗兔IgG的質控線的硝酸纖維素膜，依次按吸收墊、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊的順序粘貼在不吸水的支撐薄片上構成試紙條。

技術領域

本發明屬于動物免疫應用技術領域。具體涉及一種禽流感H9亞型病毒抗體快速定量檢測試劑盒及其應用。本發明的試劑盒可對禽流感H9亞型病毒抗體進行實時、快速的動態定量檢測，對雞群健康水平、免疫后的抗體水平監測具有重要意義。

背景技術

禽流感H9亞型(Avian influenza，AI)病毒屬于低致病性禽流感病毒，在臨床上并不能像 H5與H7高致病性禽流感病毒那樣導致雞的大批死亡。但是H9亞型禽流感感染卻可以引起雞的免疫抑制，進而導致疫苗的免疫失敗或者其它病原的繼發感染，是目前危害我國養禽業的主要病原之一，可導致禽不同程度的死亡和生產性能的下降，給我國養禽業造成極大的經濟損失。

為了避免家禽疾病的發生，疫苗免疫是有效的預防手段，但是免疫后的家禽群體的抗體監測更是不可或缺的，是評價免疫效果，掌握疫情動態最直接、最有效的方法，因此，免疫后的抗體水平監測已成為各地養禽場和診斷室的常規監測項目。

現在家禽抗體檢測的方法眾多，除傳統的沉淀反應、凝集實驗、補體結合實驗外，標記免疫測定技術如酶聯免疫測定、放射免疫測定、熒光免疫測定、發光免疫測定等已成為主要的免疫測定技術，免疫印跡法也發揮了明顯的作用，一些快速檢測方法如快速斑點免疫結合實驗也被廣泛使用不同的檢測方法，但是其靈敏度、準確性、重復性并不完全相同，加上試劑盒質量不一，都影響到實驗結果。在應用或建立一個方法時，檢測系統中所有成分的濃度必須經過嚴格的滴定，選擇最恰當的濃度范圍。但這些方法對操作人員、設備等有較高的要求。而且上述方法大多耗時較長(如血凝抑制試驗需1～2小時；ELISA試驗需2～3小時等)，不便于實時、快速診斷，所以均無法在基層大范圍地推廣使用。

膠體金免疫層析(Gold-immunochromatography assay GICA)是以膠體金作為示蹤物，基于膠體金標記技術應用于抗原抗體反應的一種免疫標記技術。其核心技術是以硝酸纖維素膜為固相載體，因毛細管作用而促使樣品溶液在層析條上泳動，并使樣品中的待檢物與層析膜上針對待檢物的受體(如抗原或抗體)在短時間內發生高特異性、高親和性的免疫反應。它具有簡便，快速，特異性強，靈敏度高，費用低的優點。

基于該技術，國內外在人醫疾病監測，環境危害監控，食品安全保障及畜禽疾病檢測等領域，都已經研制出了多種膠體金免疫層析快速檢測測試卡。在雞疫病診斷和檢測方面，雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性法氏囊及雞毒霉形體抗體免疫膠體金快速檢測試劑盒獲得相關專利(專利號：200710169103.0；200710169105.X；200710169104.5；200710169106.4)。

但是上述試劑盒是僅對相關疾病或疫苗免疫后抗體水平的進行定性或者半定量檢測，不能定量地監測雞群抗體水平。定量檢測雞群的免疫水平和評價雞群的免疫狀況對于疾病的控制有著重要的意義。

本發明將禽流感H9亞型病毒蛋白(AIVH9-HA)作為檢測線上的捕獲試劑，研制出禽流感H9亞型病毒抗體免疫膠體金快速檢測試紙條，并與膠體金生物傳感檢測儀有機整合，建立一種禽流感H9亞型病毒抗體快速定量檢測試劑盒。本發明還提供了一種監測雞群AIVH9亞型抗體水平及評估該疾病免疫效果的快速、易用的抗體定量檢測方法。