[發(fā)明專利]一種基于碳納米角及TiO2介晶納米材料的比率型電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710814541.1
• 申請(qǐng)日: 2017-09-10
• 公開（公告）號(hào): CN107727714B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戴宏;林燕語;高利紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/30
• 分類號(hào): G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種基于碳納米角及TiO₂介晶納米材料的比率型電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）玻碳電極（GCE）首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機(jī)械打磨拋光，用二次水洗去表面殘留粉末，再移入超聲水浴中清洗，直至清洗干凈，最后依序用乙醇，稀酸和水徹底洗滌；

（2）滴加3μL 濃度為3 mg/ml 的碳納米角（CNHs）懸浮液于干凈的玻碳電極表面，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，制得CNHs修飾玻碳電極；

（3）滴加3μL 濃度為0.2mmol/L的魯米諾（luminol）、濃度為2mg/mL羧甲基殼聚糖（CMCS）及濃度為2mg/mL的六氟雙酚A-硅酞菁（HFSPC）混合溶液于修飾電極表面，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，制得luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修飾玻碳電極；

（4）將luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修飾電極浸入濃度比為1:2的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）與N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）的混合液中50min，再浸入30 μL濃度為2 mg/mL辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的前列腺特異性抗原抗體（Ab₁）溶液中并在4°C冰箱中孵育45min，用去離子水洗去物理吸附的Ab₁，制得HRP-Ab₁/luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修飾玻碳電極；

（5）取60μL 濃度為1.0 wt.%的BSA 滴加到步驟（4）的修飾電極表面4°C冰箱中孵育1h，以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，用去離子水沖洗電極表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中；

（6）將步驟（5）獲得的修飾電極浸入不同濃度的前列腺特異性抗原（PSA）標(biāo)準(zhǔn)溶液中并在4°C冰箱中孵育1 h，用pH7.5的 PBS緩沖溶液沖洗電極表面，制得PSA/HRP-Ab₁/luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修飾玻碳電極；

（7）將步驟（6）獲得的修飾電極浸入50μL二萘嵌苯衍生物（PTC-NH₂）、八面體銳鈦礦型TiO₂介晶（OAMs）和前列腺特異性抗原抗體（Ab₂）組成的復(fù)合物PTC-NH₂@OAMs@Ab₂溶液中并在4°C冰箱中孵育50 min，用pH7.5的 PBS緩沖溶液沖洗電極表面，制得PTC-NH₂@OAMs@ Ab₂/PSA/HRP-Ab₁/luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修飾玻碳電極，并保存在4°C冰箱中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的濃度為0.2mmol/L的魯米諾（luminol）、濃度為2mg/mL羧甲基殼聚糖（CMCS）及濃度為2mg/mL的六氟雙酚A-硅酞菁（HFSPC）混合溶液由下述方法制備的：將濃度為2mmol/L魯米諾（luminol）, 濃度為 20mg/mL羧甲基殼聚糖（CMCS）及濃度為20mg/mL六氟雙酚A-硅酞菁（HFSPC）的溶液簡(jiǎn)單混合并適當(dāng)加入一定體積的水再均勻混合而制備成的。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的六氟雙酚A-硅酞菁（HFSPC）由下述方法制備的：將0.20 g SiPcCl₂、0.24g六氟雙酚A和0.14 g無水K₂CO₃置于30ml甲苯溶劑中在110oC 下回流48小時(shí)，然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并將溶劑減壓蒸發(fā)至干，隨后將固體產(chǎn)物置于索氏提取器中用二氯甲烷純化24小時(shí)，被提取的物質(zhì)重結(jié)晶后用體積比為1：1的甲醇和去離子水的混合液淋洗，然后重新溶解于二氯甲烷中。