[發(fā)明專利]一種禽流感H5亞型病毒抗體快速定量檢測試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710814495.5
• 申請日: 2017-09-10
• 公開（公告）號: CN107957497A
• 公開（公告）日: 2018-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王喜亮;楊帆;畢丁仁
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所42001
• 代理人: 張紅兵

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物免疫應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種禽流感H5亞型病毒抗體快速定量檢 測試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明的試劑盒可對禽流感H5亞型病毒抗體進(jìn)行實(shí)時、快速的動態(tài)定 量檢測，對雞群健康水平、免疫后的抗體水平監(jiān)測具有重要意義。

背景技術(shù)

禽流感H5亞型(Avian influenza，AI)感染可引起高致病性禽流感，病勢急迫且致死率 高，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。

在流感病毒不斷耐藥的情況下，特異性抗體是應(yīng)對流感病毒的唯一有效手段，所以為了 避免家禽疾病的發(fā)生，疫苗免疫是有效的預(yù)防手段，但是免疫后的家禽群體的抗體監(jiān)測更是 不可或缺的，是評價免疫效果，掌握疫情動態(tài)最直接、最有效的方法，因此，免疫后的抗體 水平監(jiān)測已成為各地養(yǎng)禽場和診斷室的常規(guī)監(jiān)測項(xiàng)目。

現(xiàn)在家禽抗體檢測的方法眾多，除傳統(tǒng)的沉淀反應(yīng)、凝集實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)外，標(biāo)記 免疫測定技術(shù)如酶聯(lián)免疫測定、放射免疫測定、熒光免疫測定、發(fā)光免疫測定等已成為主要 的免疫測定技術(shù)，免疫印跡法也發(fā)揮了明顯的作用，一些快速檢測方法如快速斑點(diǎn)免疫結(jié)合 實(shí)驗(yàn)也被廣泛使用不同的檢測方法，但是其靈敏度、準(zhǔn)確性、重復(fù)性并不完全相同，加上試 劑盒質(zhì)量不一，都影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在應(yīng)用或建立一個方法時，檢測系統(tǒng)中所有成分的濃度 必須經(jīng)過嚴(yán)格的滴定，選擇最恰當(dāng)?shù)臐舛确秶５@些方法對操作人員、設(shè)備等有較高的要 求。而且上述方法大多耗時較長(如血凝抑制試驗(yàn)需1～2小時；ELISA試驗(yàn)需2～3小時 等)，不便于實(shí)時、快速診斷，所以均無法在基層大范圍地推廣使用。

膠體金免疫層析(Gold-immunochromatography assay GICA)是以膠體金作為示蹤物，基于 膠體金標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種免疫標(biāo)記技術(shù)。其核心技術(shù)是以硝酸纖維素膜為 固相載體，因毛細(xì)管作用而促使樣品溶液在層析條上泳動，并使樣品中的待檢物與層析膜上 針對待檢物的受體(如抗原或抗體)在短時間內(nèi)發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應(yīng)。它具有 簡便，快速，特異性強(qiáng)，靈敏度高，費(fèi)用低的優(yōu)點(diǎn)。

基于該技術(shù)，國內(nèi)外在人醫(yī)疾病監(jiān)測，環(huán)境危害監(jiān)控，食品安全保障及畜禽疾病檢測等 領(lǐng)域，都已經(jīng)研制出了多種膠體金免疫層析快速檢測測試卡。在雞疫病診斷和檢測方面，雞 新城疫、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性法氏囊及雞毒霉形體抗體免疫膠體金快速檢測試劑盒 獲得相關(guān)專利(專利號：200710169103.0；200710169105.X；200710169104.5；200710169106.4)。

但是上述試劑盒是僅對相關(guān)疾病或疫苗免疫后抗體水平的進(jìn)行定性或者半定量檢測，不 能定量地監(jiān)測雞群抗體水平。定量檢測雞群的免疫水平和評價雞群的免疫狀況對于疾病的控 制有著重要的意義。

本發(fā)明將禽流感H5亞型病毒蛋白(AIVH5-HA)作為檢測線上的捕獲試劑，研制出禽 流感H5亞型病毒抗體免疫膠體金快速檢測試紙條，并與膠體金生物傳感檢測儀有機(jī)整合， 建立一種禽流感H5亞型病毒抗體快速定量檢測試劑盒。提供一種監(jiān)測雞群AIVH5亞型抗體 水平及評估該疾病免疫效果的快速、易用的抗體定量檢測方法。

本發(fā)明制備的試劑盒通過雙檢測線和質(zhì)控線的信號比值與被檢測血清效價(即抗體含 量)所呈現(xiàn)的對應(yīng)關(guān)系，實(shí)現(xiàn)了實(shí)時、定量檢測待測血清的效價。為防控禽流感H5亞型的 發(fā)生提供一種科學(xué)有效的技術(shù)支撐，同時也為其他疾病抗體的快速、定量監(jiān)測提供了一種參 考依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有膠體金快速檢測技術(shù)只能進(jìn)行定性檢測或半定量檢測的缺 陷，提供一種適用于禽流感H5亞型病毒抗體檢測的快速定量檢測試劑盒及應(yīng)用，本發(fā)明的 試劑盒特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡單、耗時短，能對禽流感H5亞型病毒抗體水平進(jìn)行定 量檢測。本發(fā)明的應(yīng)用能減少由人為眼觀判定引起的錯誤率，既提高了檢測的時效，又提升 了檢測結(jié)果的客觀性、準(zhǔn)確性。

本發(fā)明涉及重組載體pSmart-H5-HA的構(gòu)建與開發(fā)利用。

圖1是本發(fā)明的技術(shù)路線圖。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

申請人通過基因合成的方式得到一種禽流感H5亞型病毒抗體的抗原蛋白，其蛋白質(zhì)的 序列如序列表SEQ ID NO：2所示。