[發(fā)明專利]用于評價腸道脂質(zhì)積累及其干預(yù)試劑或試劑盒及應(yīng)用和檢測

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710811430.5
• 申請日: 2017-09-11
• 公開（公告）號: CN107632084B
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葉國注;董四君;林怡;朱慧敏
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院城市環(huán)境研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發(fā)明涉及油酸和1?單油酸甘油酯在制備用于評價受試生物腸道脂質(zhì)積累及其干預(yù)效果的試劑盒和檢測方法的新應(yīng)用。應(yīng)用本發(fā)明的試劑和方法可檢測受試生物腸道組織中油酸和1?單油酸甘油酯的含量。本發(fā)明進一步提供了利用氣相色譜?質(zhì)譜方法檢測受試生物腸道組織中油酸和1?單油酸甘油酯含量的方法，可用于評價腸道脂質(zhì)積累及其干預(yù)效果。本發(fā)明的試劑盒和檢測方法具有操作簡單、可靠、快速、高靈敏度和特異性的特點，易于推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及油酸和1-單油酸甘油酯在制備用于評價腸道脂質(zhì)積累及其干預(yù)效果的試劑或試劑盒和檢測方法的新應(yīng)用，屬于分析化學(xué)、生物化學(xué)、藥物化學(xué)領(lǐng)域。

技術(shù)背景

隨著經(jīng)濟的發(fā)展、生活方式的改變，我國心血管病危險因素流行趨勢日益明顯，導(dǎo)致心血管病發(fā)病率和死亡率不斷上升。目前，心血管病占居民疾病死亡的40％以上，為居民首位死因，已成為重大的公共衛(wèi)生問題，其防治刻不容緩。心血管病與生活方式密切相關(guān)，尤其是飲食、吸煙、運動和心理壓力。世界衛(wèi)生組織指出，四分之三的心血管病死亡可由生活方式的改變來避免。因而，心血管病的早期預(yù)警和干預(yù)，具有重要的意義。

腸道脂質(zhì)代謝與心血管病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。肉制品中的脂質(zhì)成分(如：磷脂酰膽堿、膽堿、甜菜堿、肉堿)進入人體后，由腸道微生物代謝成三甲胺，隨后被肝臟中黃素單氧酶3氧化成氧化三甲胺(TMAO)，促進血管組織中巨噬細胞攝取膽固醇，并抑制膽固醇反向轉(zhuǎn)運，從而加速泡沫細胞形成，誘發(fā)動脈粥樣硬化相關(guān)的心血管病，甚至引起死亡。此外，脂質(zhì)相關(guān)代謝物日益廣泛地應(yīng)用于心血管病發(fā)生發(fā)展的預(yù)測。對4007個病人心血管事件進行3年追蹤研究發(fā)現(xiàn)，血漿TMAO水平越高，患心血管病風(fēng)險越高，其中，血漿TMAO在6.18μM以上的人發(fā)生主要心血管事件(心肌梗塞、中風(fēng)或死亡)的風(fēng)險比TMAO在2.43μM以下的人高1.54倍。值得關(guān)注的是，白黎蘆醇等多酚類物質(zhì)，可調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抑制血小板聚集、抗氧化等作用，具有強心血管保護作用。APOE^-/-小鼠實驗證實，白黎蘆醇可通過重組腸道微生物，減少TMAO水平，增加肝臟膽汁酸合成，從而緩解TMAO誘發(fā)的動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展。因而，腸道脂質(zhì)積累及其干預(yù)效果的評價將有利于心血管病發(fā)生發(fā)展的分子機制研究、早期預(yù)防、干預(yù)和術(shù)后治療，從而可降低患病率和死亡率。

油酸是食物及生物體內(nèi)主要的游離脂肪酸，并是泡沫細胞脂滴中大分子脂質(zhì)(如：膽固醇酯和甘油三酯)的主要合成原料，參與心血管病發(fā)生發(fā)展的眾多生理過程，并被用于構(gòu)建細胞脂質(zhì)積累模型。當(dāng)前脂質(zhì)積累及其干預(yù)效果的評價大多采用油紅O或尼羅紅染色，再由光譜檢測，該評價方法測定的是脂質(zhì)混合物，無法將脂質(zhì)分子彼此分離，導(dǎo)致其靈敏度和特異性低。而游離脂肪酸和單甘油酯經(jīng)硅烷化衍生后，可由氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)實現(xiàn)高效分離，并精確區(qū)分碳鏈長度、不飽和碳鍵的數(shù)量和位置，因而該方法較光譜法具有更高的特異性和靈敏度。此外，液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)對液離脂肪酸和單甘油酯同分異體構(gòu)不飽和鍵位置的分辨能力不如氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)。

基于當(dāng)前研究現(xiàn)狀及不足，本發(fā)明采用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)檢測油酸和1-單油酸甘油酯，該方法具有操作簡單、高重復(fù)性、靈敏度和特異性的特點。本發(fā)明由正常組、脂質(zhì)積累組和干預(yù)組小鼠腸道組織獲得代謝譜，并篩選出油酸和1-單油酸甘油酯作為聯(lián)合標(biāo)志物，在制備用于評價腸道脂質(zhì)積累及其干預(yù)效果的試劑盒和檢測方法的新用途，該組合標(biāo)志物表現(xiàn)出優(yōu)良的診斷靈敏度和特異性。目前尚未發(fā)現(xiàn)將油酸和1-單油酸甘油酯聯(lián)合標(biāo)志物試劑盒用于評價腸道脂質(zhì)積累及其干預(yù)效果的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是針對當(dāng)前脂質(zhì)積累常用試劑盒檢測存在的低靈敏度和特異性等問題，提供一種組合的小分子代謝物試劑盒在評價脂質(zhì)積累及其干預(yù)效果的應(yīng)用，同時提供了可同時檢測上述小分子代謝物的方法。

油酸和1-單油酸甘油酯在制備用于評價受試生物腸道脂質(zhì)積累及其干預(yù)效果的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

所述的試劑或試劑盒用于檢測受試生物(人或動物)離體腸道組織中油酸和1-單油酸甘油酯的含量。