[發明專利]一種從山里紅葉中轉化和分離牡荊素的方法

在審

• 申請號: 201710806605.3
• 申請日: 2017-09-08
• 公開（公告）號: CN107721992A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 羅猛;牟璠松;阮鑫;宋卓悅;胡嬌陽;邢文淼;楊璇;陳民;焦嬌;蓋慶巖;付玉杰
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: C07D407/04
• 分類號: C07D407/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種從植物中轉化和分離活性成分的方法，具體涉及一種從山里紅葉中轉化和分離牡荊素的方法，屬于藥用植物開發領域。

背景技術

山里紅(Crataegus pinnatifida Bge.var.Major N.E.Br.)為薔薇科植物，是《中國藥典》2010 版山楂項下一種重要的藥材原植物，東北是山里紅的主產地之一。山里紅果實具有降血壓、降血脂、抗腫瘤、抗菌等功效，在以往的研究中多進行藥品食品開發研究。研究表明，山里紅葉含有豐富的對健康有益的活性成分。目前，已經從山里紅葉中發現了150多種化學成分，包括黃酮，三萜，類固醇，木酚素，有機酸，和含氮化合物等。其中黃酮類含量最多，其中牡荊素-4″-O-葡萄糖苷，牡荊素-2″-O-鼠李糖苷，葒草苷，蘆丁，牡荊素，金絲桃苷等均具有明顯的抗氧化活性。這些活性成分具有良好的藥用價值，可用于心血管、消化、內分泌系統等疾病的治療。因此，山里紅葉作為一種可再生資源，對其進行深入研究和開發具有重要意義。

最近有研究表明，牡荊素具有增加冠狀動脈血流量，保護心腦血管系統等重要作用。山里紅葉中牡荊素-4″-O-葡萄糖苷和牡荊素-2″-O-鼠李糖苷含量高于牡荊素，然而他們的藥理活性卻不及牡荊素，因此可以采用化學轉化技術將其轉化為牡荊素，為工業化生產牡荊素提供一個新的來源。

本發明旨在建立一種通過現代轉化和分離技術，實現簡單、快速、高效制備高純度牡荊素。

發明內容

本發明的目的在于提供一種以山里紅干燥葉為原料，通過酸水解轉化技術、大孔吸附樹脂分離技術、重結晶技術獲得高純度牡荊素的工藝方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：將山里紅葉經過3-7天自然風干或在30- 50℃下烘干24-36h，經粉碎后可通過60目篩網。取山里紅干燥葉粉末加入0-75％的乙醇溶液，料液比為1:10-1:25，然后加入0-3M濃鹽酸，在微波功率500-900W、微波轉化溫度60-75℃的條件下，微波轉化時間20-50min，轉化次數1-3次，收集轉化產物，減壓濃縮至干。再將山里紅葉轉化產物溶解于5-30％的甲醇或乙醇溶液中，經D101、AB-8、NKA-9、 HPD-600樹脂吸附，固液比為1:10-1:20，吸附液流速1-5mL/min，然后以30-70％乙醇洗脫，洗脫液流速3-10mL/min，收集洗脫液中牡荊素含量大于60％的流份，減壓濃縮，洗脫液中牡荊素含量小于60％的流份重新上柱，并重復此步過程，至濃縮物中牡荊素的含量大于60％。將得到的牡荊素含量大于60％的濃縮物中加入10-90％的甲醇或乙醇溶液，固液比為1:100-1:1000，4℃結晶，過濾，得到結晶，然后向結晶中加入10-90％的甲醇或乙醇溶液，固液比為1:100-1:1000，以80-100℃的溫度水浴溶解，冷卻至室溫，析出結晶，得到純度大于95％的牡荊素。

本發明的優點：

(1)本發明所利用的山里紅葉是一種可再生資源，可以作為工業提取牡荊素的新原料；

(2)本發明實現了山里紅資源的充分利用，最終產品得率高、純度高，其中牡荊素得率大于 60％，純度大于95％。

附圖說明

附圖1牡荊素結構圖

附圖2牡荊素-4″-O-葡萄糖苷結構圖

附圖3牡荊素-2″-O-鼠李糖苷結構圖

附圖4混合標準品的HPLC圖(HPLC檢測條件如下，色譜條件為：色譜柱為HiQ sil C₁₈柱(5 μm，250mm×4.6mm)，流動相為四氫呋喃:乙腈:水:磷酸＝175:31:794:0.325，流速為1.0mL/min，檢測波長350nm，柱溫30℃，進樣量為10μL。)

附圖5山里紅葉微波輔助酸水解產物的HPLC圖

附圖6重結晶后牡荊素產品HPLC圖

附圖7雞胚絨毛尿囊膜用于藥物傳遞系統的體內實驗圖(A.雞胚絨毛尿囊膜的垂直視圖，B. 空白對照組，C.山里紅葉微波輔助酸水解提取物組，D.山里紅葉微波輔助法提取物組，E.陽性對照組，F.牡荊素產品用藥組，G.牡荊素-4″-O-葡萄糖苷用藥組，H.牡荊素-2″-O-鼠李糖苷用藥組)

附圖8雞胚絨毛尿囊膜實驗中血管數的統計結果(I，II，III代表不同尺寸的血管，I級血管直徑100-300μm，II級血管直徑50-100μm，III級血管直徑小于50μm)

具體實施方案

實施例1：