[發明專利]一種雙模式識別層析介質及其制備方法

有效

• 申請號: 201710805339.2
• 申請日: 2017-09-08
• 公開（公告）號: CN107737583B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 施偉
• 申請（專利權）人: 臺州學院
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01J20/28;B01J20/30;C08G77/04;C08G77/06
• 代理公司: 藍天知識產權代理(浙江)有限公司 33229
• 代理人: 羅佩芝

本發明公開了一種具有混合模式及分子印跡模式的雙模式識別層析介質及其制備方法。選擇混合模式介質與模板蛋白進行充分吸附；在介質表面使用四甲氧基硅烷及苯基三乙氧基硅烷進行聚合形成印跡層；印跡介質依次用鹽酸溶液，氫氧化鈉溶液及去離子水洗滌，去除模板蛋白，得到雙模式層析介質。本發明所研制的新型層析介質，兼有混合模式與分子印跡模式兩種識別能力，利用分子印跡聚合物對大分子物質的空間位阻，大幅提升混合模式介質對于大分子雜質的去除能力，提高層析的選擇性，并保留混合模式良好的吸附性能，以及pH依賴和耐鹽吸附能力。

技術領域

本發明涉及一種具有混合模式及分子印跡模式的雙模式識別層析介質及其制備方法，屬于生物化工領域中蛋白層析分離技術。

背景技術

近年來，以蛋白藥物為代表的生物大分子藥物的發展愈加迅猛，在治療診斷領域的應用不斷擴大，其產值在整個醫藥領域所占比例也持續增加。與化學藥物相比，生物藥物不但要求產品純度要高，同時還需保持生物活性，所以分離純化難度較大。對于整個生物藥物生產工藝而言，分離純化步驟成本高達50～80％，成為阻礙生物藥物進一步產業化的瓶頸。如何進一步提升生物藥物的分離純化效率成為亟待解決的問題。

層析技術是分離純化領域中最為重要的技術，隨著生物技術的發展，新型介質與方法不斷推出。混合模式層析是近年來新興的，具有較大潛力的層析技術。該技術的介質兼有多種作用模式，包括靜電作用力，疏水作用力，氫鍵作用力等。因而混合模式層析具有較高選擇性，較大吸附容量，耐鹽吸附及成本較低等優勢。目前被用于多種傳統模式層析的替代或補充。但混合模式層析的選擇性仍然不令人滿意。一個重要原因在于混合模式配基對于蛋白的識別區域較小，識別位點單一，容易與雜質發生混淆，如混合模式配基4-巰基乙基吡啶，識別抗體的位點為位于其Fc片段上的Y319和L309(Acta Chim.Sinica,2010，68：1597)；5-氨基苯并咪唑則主要與Fc片段上His 435,Met 252和Ile 253相互作用(J.Sep.Sci.,2015，38：2387)。因此在保持混合模式原有優勢的基礎上，通過增加額外識別模式，將是一種有效途徑。

分子印跡技術是一項出色的分子識別技術，20世紀80年代由德國Wulff等人所提出(Tetrahedron Lett.,1973:4329)。它通過與目標物在分子大小，形狀以及功能位點上的匹配實現識別，被廣泛應用于分離分析領域。近年來分子印跡被應用于生物大分子的報道日漸增多，但與小分子相比，大分子領域的分子印跡仍然是一個巨大的挑戰。其原因在于大分子物質復雜的結構與巨大的尺寸阻礙了印跡過程的進行與傳質效率。通常情況下，大部分研究致力于消除這種空間位阻，提升傳質效率。但從另一個角度考慮，將分子印跡聚合物對大分子物質的空間位阻效應加以合理利用，可以提高介質對大分子雜質的分辨能力。本發明選擇表面分子印跡技術，用于混合模式介質表面聚合，在阻遏大分子雜質進入介質的同時保證目標蛋白的傳質效率。最終所研制介質充分保留了混合模式介質優秀的吸附能力，pH依賴與耐鹽吸附性能，同時層析介質的選擇性獲得大幅提升，適于雜質為大分子物質的分離純化。

發明內容

本發明的目的是提供一種具有混合模式及分子印跡模式的雙模式識別層析介質及其制備方法。

具有混合模式及分子印跡模式的雙模式識別層析介質包括層析基質，混合模式配基和印跡層，所述的層析基質為帶有羥基的親水性多孔微球，混合模式配基為色胺，印跡聚合單體為四甲氧基硅烷及苯基三乙氧基硅烷。

層析介質表面的結構組成為圖1。

所述層析基質為具有多孔結構和表面羥基的親水性微球。所述層析基質為瓊脂糖凝膠或纖維素微球。

所述層析介質表面同時具有混合模式配基及分子印跡層。

所述具有混合模式及分子印跡模式的雙模式識別層析介質的制備方法包括如下步驟：