[發明專利]用于敲除人ALDH2基因的sgRNA、ALDH2基因缺失細胞株的構建方法及應用有效
| 申請號： | 201710803984.0 | 申請日： | 2017-09-08 |
| 公開（公告）號： | CN107502608B | 公開（公告）日： | 2020-10-16 |
| 發明（設計）人： | 王慶;王飛;郭濤;李若碧;江紅梅;王婷;曾妮 | 申請（專利權）人： | 中山大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/90;C12N5/10;C12N9/22;C12N15/867 |
| 代理公司： | 廣州獨角熊知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 44580 | 代理人： | 張小黎 |
| 地址： | 510080 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 aldh2 基因 sgrna 缺失 細胞株 構建 方法 應用 | ||
1.一種用于敲除人ALDH2基因的sgRNA序列，其特征在于，所述sgRNA的靶DNA序列為SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列中的至少一條。
2.一種敲除人肝癌細胞ALDH2基因的方法，其特征在于，為利用CRISPR/Cas系統在人肝癌細胞中對ALDH2基因進行改造，具體包括如下步驟：
(1)人工合成如權利要求1所述的靶DNA序列及其互補鏈；
(2)將所合成的核酸片段插入到sgRNA骨架表達質粒載體的多克隆位點并轉化，挑單克隆菌株，提取sgRNA重組質粒，測序鑒定獲得測序正確的sgRNA重組質粒；其中，sgRNA骨架表達質粒載體還表達Cas9核酸酶；
(3)將sgRNA重組質粒轉染人肝癌細胞，即得敲除ALDH2基因的人肝癌細胞。
3.一種ALDH2基因缺失細胞株的構建方法，其特征在于，采用慢病毒轉染法或有限稀釋法對如權利要求2所得的敲除ALDH2基因的人肝癌細胞進行傳代篩選，獲得穩定敲除ALDH2的人肝癌細胞。
4.一種ALDH2基因缺失細胞株，其特征在于，為采用如權利要求3所述的ALDH2基因缺失細胞株的構建方法所制得。
5.一種如權利要求1所述的用于敲除人ALDH2基因的sgRNA序列在敲除ALDH2基因中的應用。
6.一種用于在人基因組中進行ALDH2基因定點敲除試劑盒，其特征在于，包括如下(1)-(3)中的任一種：
(1)如權利要求1所述的用于敲除人ALDH2基因的sgRNA序列；
(2)如權利要求2所述的sgRNA重組質粒；
(3)如權利要求4所述的ALDH2基因缺失細胞株。
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