[發明專利]一種基于石墨烯、硫堇和核酸適配體檢測甲胎蛋白的方法

有效

• 申請號: 201710798849.1
• 申請日: 2017-09-07
• 公開（公告）號: CN107677719B
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發明（設計）人: 李桂銀;李珊珊;薛葉薇;黃勇;梁晉濤;王志宏;董辰楊;周治德
• 申請（專利權）人: 桂林電子科技大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 羅玉榮

一種基于石墨烯、硫堇和核酸適配體檢測甲胎蛋白的方法，采用電沉積技術在絲網印刷電極表面沉積納米金，通過靜電吸附作用將滴在電極表面的石墨烯和硫堇吸附到絲網印刷電極表面，利用硫堇作為橋分子捕獲核酸適配體到修飾電極表面。利用石墨烯巨大的比表面積和信號放大作用，利用硫堇對適配體的高負載能力以及適配體對甲胎蛋白的特異性識別作用，建立能特異性檢測甲胎蛋白水平的納米適配體生物傳感器。通過差分脈沖伏安法檢測出峰值電流，并描繪出該電流與甲胎蛋白濃度的關系曲線，實現對甲胎蛋白的檢測，達到時間短，成本低，特異性高。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種檢測甲胎蛋白的方法。

背景技術

甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein, AFP）是白蛋白家族的一種糖蛋白，它是由590多個氨基酸殘基形成的單多肽鏈，甲胎蛋白在正常成人體內的含量很少，而在肝癌患者體內甲胎蛋白的含量和肝細胞癌的分化程度有關。AFP檢測方法主要有酶聯免疫吸附法、熒光免疫分析法、電化學發光法和電化學免疫傳感器。然而，常規的免疫測定具有其固有的缺點，例如酶聯免疫法存在放射性污染，免疫分析中使用的酶和抗體的活性易受外界溫度、pH值的影響，在電極表面不穩定，且價格昂貴。SU等人2010年構建了一種基于硫堇/納米金自組裝膜的電化學免疫傳感器來檢測人體血清中AFP的含量（SU B, TANG J, CHEN H, et al.Thionine/nanogold multilayer film for alpha-fetoprotein in electrochemicalimmunoassay of humanrerun using biofunctional double-codified goldnanoparticles[J]. Analytical Methods, 2010, 2(11):1702-1709）。 Zhai等人2016年將碳化鉬納米管用做納米載體來固定硫堇分子以構成電化學免疫傳感器檢測AFP（Zhai Q,Zhang X, Li J, et al. Molybdenum carbide nanotubes: a novel multifunctionalmaterial for label-free electrochemical immunosensing[J]. Nanoscale, 2016, 8(33):153-158）。 Ni Hui等人2016年將AFP抗體固定在聚乙二醇/納米金/聚苯胺修飾的金電極上構建了一種用于檢測AFP的電化學免疫傳感器（Hui N, Sun X, Song Z, Niu S,Luo X. Gold nanoparticles and polyethylene glycols functionalized conductingpolyaniline nanowires for ultrasensitive and low fouling immunosensing ofalpha-fetoprotein. Biosens Bioelectron. 2016, 86:143-149）。這些方法操作復雜、成本高且技術要求高，因此需要建立一種快速、靈敏、操作簡便的AFP檢測方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種基于石墨烯、硫堇和核酸適配體檢測AFP的方法，解決傳統AFP檢測方法費用昂貴、操作復雜且技術要求高的問題。

為了解決上述技術問題，本發明使用核酸適配體代替抗體，利用適配體對AFP的高特異性來捕獲AFP，通過石墨烯巨大的比表面積和信號放大作用，利用硫堇做信號指示劑來實現AFP的檢測。與現有的方法相比，操作相對簡單，而且時間和費用的消耗更少。