[發明專利]人心肌肌鈣蛋白I的雜交瘤細胞株7H4及單克隆抗體和應用

有效

• 申請號: 201710797562.7
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN107603955B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 王宏;余娟;李文麗
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 單香杰

本發明公開了人心肌肌鈣蛋白I的雜交瘤細胞株7H4及單克隆抗體和應用。所述雜交瘤細胞株7H4于2017年8月23日保存在中國典型培養物保藏中心（CCTCC），保藏編號為CCTCC NO：C2017121。雜交瘤細胞株7H4分泌的單克隆抗體7H4是一種高親和力、高特異性的cTnI鼠源性單克隆抗體，能夠結合游離的cTnI、二聚體復合物cTnI?C、三聚體復合物cTnI?T?C三種形式的cTnI，因此可以用于檢測血清中cTnI含量，為開發快速檢測心肌梗塞試劑盒奠定基礎。

技術領域

本發明涉及細胞免疫技術領域，更具體地，涉及人心肌肌鈣蛋白I的雜交瘤細胞株7H4及單克隆抗體和應用。

背景技術

心肌肌鈣蛋白是調控心臟收縮的關鍵蛋白。由心肌肌鈣蛋白I（cTnI）、心肌肌鈣蛋白C（cTnC）和心肌肌鈣蛋白T（cTnT）三個亞基組成的三聚體復合物。cTnI是肌動蛋白的抑制亞基，通過抑制肌動蛋白的三磷酸腺苷（ATPase）的活性來調控肌動蛋白和肌球蛋白的相互作用。cTnI的分子量約為24kDa，由209個氨基酸組成，是一種富含α螺旋的蛋白，理論等電點為9.87。TnI（肌鈣蛋白I）存在三種亞型：骨骼肌肌鈣蛋白I（sTnI）中存在快骨骼肌型和慢骨骼肌型，它們具有相似的分子量（20KD），但二者之間的氨基酸序列約存在40%的差異；第三種為心肌型。心肌肌鈣蛋白I（cTnI）與骨骼肌型的氨基酸序列也存在40%的差異，cTnI末端比sTnI末端多31個氨基酸，并且cTnI在心肌細胞中只存在一種亞型，決定了cTnI在心肌細胞中的特異性。cTnI分子的第22位和第23位是絲氨酸。這兩個氨基酸都可以在體內被蛋白激酶A磷酸化，因而在體內cTnI存在四種不同磷酸化類型。

急性心肌梗塞（Acute myocardial infarction, AMI）是最常見的心血管疾病之一，是在冠狀動脈病變的基礎上，冠狀動脈的血流急劇減少或中斷，使相應的心肌出現嚴重而持久地急性缺血所導致的冠狀動脈病變，最終引起心肌的缺血性壞死。病情嚴重時，心臟無法再行使其泵血的功能，會導致病人突然死亡。因此，急性心肌梗塞的早期診斷對于其預防和治療是非常重要的。cTnI被研究者認為是AMI診斷最好的生物指標之一，由于其在心肌受損時才在血液中出現，并且出現時間早，持續時間久，特異性強，因此國際臨床化學聯盟（IFCC）、美國臨床生化學會（NACB）和中華醫學檢驗分會等權威機構已經將cTnI作為AMI診斷的“金標準”。

在心肌梗塞標志物中，cTnI被認為是比其他標志物更靈敏，特異性更高的“金標”。當心肌細胞的細胞膜完整時，cTnI是不能夠透過細胞膜進入到血液中的。只有當心肌細胞受損時，cTnI迅速從心肌細胞釋放到血液中，2～8小時內開始升高，在1-2天內達到頂峰，并且在3-8天后仍然能測到cTnI的量在升高，理論上cTnI在血清中維持的時間超過10天，較久的診斷窗口期對于心肌梗塞的診斷是非常重要的。研究證明，正常人和心肌梗塞患者血清中cTnI的臨界值是50pg/mL，發病時血中濃度可達100～300μg/L。在血液中大部分的cTnI是以cTnI-T-C或者cTnI-C復合物的形式存在。在研究中發現cTnI開始是以單體的形式釋放到血液中，但是隨著心肌損傷程度增加，為了防止cTnI被降解，cTnI會以復合物的形式存在，接著由于各種因素的影響，復合物又分解成單體，所以用于檢測cTnI的抗體應該能以同樣的效率識別血液中各種復合形式的cTnI，而現有技術中嚴重缺乏這樣的單克隆抗體資源。

發明內容

本發明為了克服現有技術中的上述不足，提供一株人心肌肌鈣蛋白I的雜交瘤細胞株7H4。

本發明的另一個目的是提供上述雜交瘤細胞株7H4分泌的單克隆抗體，單克隆抗體命名為人心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體7H4，單克隆抗體7H4是一種高親和力、高特異性的cTnI鼠源性單克隆抗體，能夠結合游離的cTnI、二聚體復合物cTnI-C、三聚體復合物cTnI-T-C三種形式的cTnI，因此可以用于檢測血清中cTnI含量，為開發快速檢測心肌梗塞試劑盒奠定基礎。