[發明專利]一種氟甲喹的手性對映體的檢測方法

有效

• 申請號: 201710797075.0
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN107589189B
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 谷旭;薛墨庸;秦玉昌;李軍國;高云峰;李俊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院飼料研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

本發明提供了一種氟甲喹的手性對映體的檢測方法，該檢測方法可以實現氟甲喹手性對映體的拆分，且該方法既可應用于沉積物的檢測，也可應用于河或池塘水的檢測。在1.0μg/L至200μg/L的濃度范圍呈現良好的線性關系，在河水樣或池塘水樣中，S?(?)?氟甲喹和R?(+)?氟甲喹的檢測限(LOD)值為2.5μg/kg，定量限(LOQ)值為8.0μg/kg；沉積物樣品中，兩個對映體的LOD和LOQ值分別為5μg/kg和15μg/kg；河水樣或池塘水樣中S?(?)?氟甲喹和R?(+)?氟甲喹的回收率為81.0?82.8％，沉積物樣品中兩個對映體的回收率為73.6?77.5％。

1、技術領域

本發明涉及一種氟甲喹的手性對映體的檢測方法，具體涉及一種沉積物、河水或池塘水樣品中氟甲喹的手性對映體的檢測。

2、背景技術

近年來抗生素的大量使用已經導致其在環境中的殘留，在地球的各種環境中都檢測到了殘留的人類或獸用抗生素，這些抗生素最終會給陸地和水中的各種生物帶來潛在的危險。

氟甲喹(Flumequine，FMQ)為第二代氟喹諾酮類廣譜抗菌藥物，其主要作用于DNA轉旋酶A亞單位，抑制其活性，從而使得脫氧核糖核酸、核糖核酸以及蛋白質的合成受阻，阻止細菌細胞分裂以達到殺菌藥效。氟甲喹結構式中含有一個手性碳原子，因此含有一對手性對映體，對映體結構如下式I所示。

式I氟甲喹對映體結構式

手性對映體往往會表現出不同的生物活性和環境行為。手性藥物在生物體內往往存在立體選擇性，對映體浸入生物體后與血漿蛋白、轉運蛋白以及其他具有立體特異性代謝酶作用，引起對映體毒性、代謝途徑、生物活性的差異，有的對映體活性較強，可達到理想作用，其他對映體活性不高甚至對機體產生毒性作用。

由于氟甲喹具有抗菌譜廣、與其他類抗生素藥物沒有交叉耐藥性特點，已廣泛應用于水產養殖中，然而氟甲喹在水生生物體內的生物利用度很低，在養殖水體及底泥中的降解也很慢，加之過度使用，已經導致了氟甲喹的殘留。

發明專利CN201410459726.1公開了一種海水中氟甲喹手性對映體的檢測方法，但該方法僅能應用于海水中氟甲喹手性對映體的檢測，且在檢測時需要在流動相中加入添加劑。

3、發明內容

本發明提供了一種氟甲喹對映體的檢測方法，該方法可以實現氟甲喹手性對映體的拆分，且該方法既可應用于沉積物的檢測，也可應用于河水或池塘水的檢測。

本發明要求保護一種氟甲喹對映體的檢測方法，檢測步驟為：

(1)將沉積物、河水或池塘水樣品進行前處理，待凈化；

(2)將Cleanert PEP固相萃取小柱(150mg/6mL)進行活化，將上述待凈化液上樣于Cleanert PEP(150mg/6mL)固相萃取小柱上，棄去流出液，再用6mL 5％甲醇水溶液淋洗，棄去流出液，抽干小柱，再用洗脫劑進行洗脫，收集流出液于45℃下氮吹至干，用流動相定容至1mL，過0.45μm Nylon針式過濾器過濾，待檢測；

(3)使用Lux 5μm Cellulose-2(250mm×4.6mm i.d.×5μm,Phenomenex,USA)手性柱，以0.2％甲酸水為流動相A，乙腈為流動相B，進行梯度洗脫，流速為1mL/min，運行時間為30min，柱溫30℃，進樣體積為1μL，Q-TOF檢測為電噴霧離子源，霧化器壓力為55psi，碰撞能量10V，毛細管電壓5.5kV，離子溫度600℃，質量范圍m/z 100-700。

所述的沉積物樣品的前處理方法為：稱取樣品，加入提取液，渦旋1min，超聲提取10min，8000rpm離心5min，轉移上清液，殘渣再重復上述操作提取2次，合并3次上清液，45℃旋蒸至15mL左右，加水稀釋至30mL，混勻，待凈化。