[發(fā)明專(zhuān)利]植物作為宿主在表達(dá)胰島素樣生長(zhǎng)因子中的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710796557.4
• 申請(qǐng)日: 2017-09-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109456397A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王躍駒;馬潔;焦順昌
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京睿誠(chéng)海匯健康科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/475
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/475;C12N15/82;C12N15/66
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳;趙青朵

1.植物作為宿主在表達(dá)胰島素樣生長(zhǎng)因子中的應(yīng)用；所述植物選自生菜、白菜、玉米、大豆或小麥；所述植物的器官選自種子、葉、根莖或整株植物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述胰島素樣生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子為人胰島素樣生長(zhǎng)因子。

3.一種表達(dá)載體，其特征在于，包括胰島素樣生長(zhǎng)因子的核苷酸序列和雙元植物載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體，其特征在于，所述胰島素樣生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子為人胰島素樣生長(zhǎng)因子。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的表達(dá)載體，其特征在于，其構(gòu)建方法包括如下步驟：

步驟1：在胰島素樣生長(zhǎng)因子的核苷酸序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位點(diǎn)，在3’末端加入Sacl限制性酶切位點(diǎn)；

步驟2：克隆獲得pUC57-IGF克隆載體；

步驟3：通過(guò)Xbal/Sacl分別從步驟2所得的克隆載體中獲得基因片段IGF，克隆至雙元植物載體pCam35S，獲得表達(dá)載體p35S-IGF。

6.根據(jù)權(quán)利要求3至5任一項(xiàng)所述的表達(dá)載體在表達(dá)胰島素樣生長(zhǎng)因子中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述胰島素樣生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子為人胰島素樣生長(zhǎng)因子。

8.一種植物作為宿主表達(dá)胰島素樣生長(zhǎng)因子的方法，其特征在于，將如權(quán)利要求3至5任一項(xiàng)所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)真空滲透入植物組織后，提取、分離蛋白質(zhì)，獲得胰島素樣生長(zhǎng)因子；

所述植物選自生菜、白菜、玉米、大豆或小麥；所述植物的器官選自種子、葉、根莖或整株植物。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述胰島素樣生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子為人胰島素樣生長(zhǎng)因子。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述農(nóng)桿菌介導(dǎo)真空滲透包括如下步驟：

步驟1：抽真空25～45s；

步驟2：保持真空-95kPa壓力30～60s；

步驟3：釋放壓力使得滲透液滲入所述植物組織；

重復(fù)上述步驟2～3次，避光處理4d。