[發(fā)明專利]一種從鐵皮石斛菌根菌中制備鐮刀菌的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710796198.2
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN109456897A
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱東君
• 申請（專利權(quán)）人: 新昌縣金石鐵皮石斛專業(yè)合作社
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種從鐵皮石斛菌根菌中制備鐮刀菌的方法，選用生長于海拔不高于1000米的健康鐵皮石斛根原料先培養(yǎng)菌根菌，然后對菌根菌進行分離和純化后制得鐮刀菌；菌根菌培養(yǎng)時，將鐵皮石斛根用自來水沖洗干凈，晾干后，用70%酒精棉球消毒3次，用無菌的剪刀剪成3?5mm的小段，均勻放在馬鈴薯200g、蔗糖20g、水1000mL混合的液體PDA培養(yǎng)基上，放在25?28℃的人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)5?7天；形成菌根菌后將真菌菌落和細菌菌落分離進行分離，在真菌菌落邊緣挑取幼嫩、無雜菌的菌落移至內(nèi)裝300 mL PDA培養(yǎng)基液體的500 mL三角燒瓶內(nèi)繼續(xù)震蕩培養(yǎng)7天，即可制得鐮刀菌。本發(fā)明方法制備簡便，成本低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物生長促進材料制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其與一種從鐵皮石斛菌根菌中制備鐮刀菌的方法有關(guān)。

背景技術(shù)

鐵皮石斛是一種蘭科草本植物，莖直立，圓柱形，不分枝，具多節(jié)，節(jié)間長1-3-1.7厘米。鐵皮石斛也是一種為菌根植物，在自然條件下，所有石斛屬植物均與內(nèi)生真菌共生形成菌根結(jié)構(gòu)，菌根真菌在植物整個生活史中扮演著重要的角色。在鐵皮石斛菌根真菌中以鐮刀菌對鐵皮石斛生長促進作用最為明顯。為使鐮刀菌的使用批量產(chǎn)業(yè)化，開發(fā)從鐵皮石斛菌根菌中制備鐮刀菌的方法已成為一個急迫的技術(shù)需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的旨在解決如何從鐵皮石斛菌根菌中制備鐮刀菌的技術(shù)問題，提供一種從鐵皮石斛菌根菌中制備鐮刀菌的方法。

為此，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種從鐵皮石斛菌根菌中制備鐮刀菌的方法，其特點是，所述方法是選用生長于海拔不高于1000米的健康鐵皮石斛根原料先培養(yǎng)菌根菌，然后對菌根菌進行分離和純化后制得鐮刀菌；菌根菌培養(yǎng)時，將合格的鐵皮石斛根用自來水沖洗干凈，晾干后，用70%酒精棉球消毒3次，用無菌的剪刀將鐵皮石斛根剪成3-5mm的小段，均勻放在PDA培養(yǎng)基上，放在25-28℃的人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)5-7天，PDA培養(yǎng)基采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，液體培養(yǎng)基為馬鈴薯200g、蔗糖20g、水1000mL的混合物；形成菌根菌后將真菌菌落和細菌菌落分離進行分離，在分離得到的真菌菌落中挑取菌落邊緣的幼嫩、無雜菌的菌落移至另一個培養(yǎng)容器內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)容器采用500 mL的三角燒瓶，三角燒瓶里裝300mL 的PDA培養(yǎng)基液體，把菌種放在三角燒瓶里，在恒溫振蕩器里震蕩培養(yǎng)7天，即可制得適合促進鐵皮石斛苗生長的鐮刀菌。

本發(fā)明可以達到以下有益效果：通過使用液體PDA培養(yǎng)基先培養(yǎng)菌根菌，然后從菌根菌中分離純化出適合促進鐵皮石斛苗生長的鐮刀菌，制取簡單方便，培養(yǎng)基成本低，利于批量產(chǎn)業(yè)化。

具體實施方式

本發(fā)明方法選用生長于海拔不高于1000米的健康鐵皮石斛根原料先培養(yǎng)菌根菌，然后對菌根菌進行分離和純化后制得鐮刀菌；菌根菌培養(yǎng)時，將合格的鐵皮石斛根用自來水沖洗干凈，晾干后，用70%酒精棉球消毒3次，用無菌的剪刀將鐵皮石斛根剪成3-5mm的小段，均勻放在PDA培養(yǎng)基上，放在25-28℃的人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)5-7天，PDA培養(yǎng)基采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，液體培養(yǎng)基為馬鈴薯200g、蔗糖20g、水1000mL的混合物；形成菌根菌后將真菌菌落和細菌菌落分離進行分離，在分離得到的真菌菌落中挑取菌落邊緣的幼嫩、無雜菌的菌落移至另一個培養(yǎng)容器內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)容器采用500 mL的三角燒瓶，三角燒瓶里裝300mL 的PDA培養(yǎng)基液體，把菌種放在三角燒瓶里，在恒溫振蕩器里震蕩培養(yǎng)7天，即可制得適合促進鐵皮石斛苗生長的鐮刀菌。