[發明專利]一種測定酸性糖可溶性鹽重均分子量和含量的方法

有效

• 申請號: 201710795513.X
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN109459523B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 張真慶;曾洋洋
• 申請（專利權）人: 上海綠谷制藥有限公司;蘇州大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N21/73
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳文平;馬慧

本發明屬于天然藥物化學及其質量控制領域，涉及一種測定酸性糖可溶性鹽重均分子量和含量的方法，包括使用酸性糖可溶性鹽中的金屬離子含量對分子篩色譜結合多角度激光散射檢測器SEC?MALS測定酸性糖的重均分子量和含量結果進行校正。利用本發明方法可更快速、準確地測定酸性糖可溶性鹽的重均分子量和含量。

技術領域

本發明屬于天然藥物化學以及其質量控制領域，具體地涉及酸性糖類物質的重均分子量和含量的測定和質量控制方法。

背景技術

多糖是天然來源的主要的生物活性化合物，可來自植物、真菌等。多糖的分子量大，結構復雜，因此，多糖的分子量的準確測定是一個挑戰。

目前，中國藥典中，高效液相凝膠滲透色譜法(Gel Permeation Chromatography,GPC)是測定分子量的常規做法，其是按照排阻色譜的原理，不同分子量的多糖按照其大小順序先后流出色譜柱，通過一系列不同分子量標準多糖與保留時間的相關性測得的校正曲線并計算相應的待測多糖的相對分子量。但該常規方法必須要有相應的多糖標準品而有一定的局限性。

此外，多糖和寡糖含量測定的常用方法為硫酸咔唑法，該方法首先以濃度及單糖標準品的顯色做標準曲線，再在標準曲線上讀出待測樣品的含量。但是酸性糖的單糖甘露糖醛酸并沒有標準品出售，若以葡萄糖醛酸為標準品，其與酸性糖的結構及顯色效率存在差異，不能對酸性糖進行精確定量。

近年來出現的尺寸排阻色譜聯用多角度激光散射(Size-ExclusionChromatography/Multi-Angle Laser Light Scattering，SEC-MALS)測定樣品絕對重均分子量、分子量分布和含量在業界引起了廣泛的關注。本領域中有研究人員將MALS和尺寸排阻色譜(SEC)聯用，不必依賴泵的流速、校正曲線及其他錯誤的假設，即可直接求得分子量及分子量分布等數據。MALS利用色譜柱分離出的樣品在不同角度的光散射量，由示差折光(RI)檢測器得到洗脫液濃度及dn/dc值計算得到質量，綜合兩者即可計算出各個切片的分子量。該方法不需標準品校準，克服了樣品與標準品的化學組成、分子結構及大小不同帶來的相對分子量測定的誤差。已有研究者采用這一方法測定了殼聚糖、透明質酸的平均分子量(Monica Fee,Neil Errington,Kornelia Jumel,et al.Correlation of SEC/MALLSwith ultracentrifμge and viscometric data for chitosans.Eur Biophys J(2003)32:457～464；Sanya Hokputsa,Kornelia Jumel,Catherine Alexander,etal.Comparison of molecular mass determination of Hyaluronic acid using SEC/MALLS and sedimentation equilibrium.Eur Biophys J(2003)32:450～456)，還有研究者采用該方法對天然中性多糖進行定量，(Kit-Leong Cheong,Ding tao Wu,Jing Zhao,etal.A rapid and accurate method for the quantitative estimation of naturalpolysaccharides and their fractions using high performance size exclusionchromatography coupled with multi-angle laser light scattering and refractiveindex detector.Journal of Chromatography A(2015)1400:98～106)。目前歐洲藥典已經采用此方法作為羥乙基淀粉重均分子量及分子量分布的測定方法(Europeanpharmacopoeia 8.0,p3307-3308,starches hydroxyethyl)。

綜上，SEC-MALS可以測定中性多糖重均分子量及含量。

發明內容