[發明專利]一種植物基因組DNA快速提取方法

有效

• 申請號: 201710795010.2
• 申請日: 2017-09-06
• 公開（公告）號: CN107475248B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 賈雪榮;張文寶;王亞周
• 申請（專利權）人: 成都晟博源生物工程有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 成都三誠知識產權代理事務所(普通合伙) 51251
• 代理人: 成實

1.一種植物基因組DNA快速提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)取植物組織樣品，加入液氮將植物組織樣品研磨成粉末，并收集到離心管中；

(2)向離心管中加入BufferA，并進行水浴，使植物組織樣品與BufferA混勻；

(3)向離心管中加入BufferB混勻，并進行離心處理；

(4)收集上清液，并向上清液中加入結合液LN充分混勻，得到混合液；

(5)向吸附柱中加入平衡液LB，并離心處理后倒掉收集管中的濾液；

(6)將步驟(4)中的混合液加入吸附柱中，離心處理后倒掉廢液；

(7)向吸附柱中加入漂洗液PW，離心后倒掉廢液；重復步驟(7)后執行步驟(8)；

(8)將吸附柱進行離心，去除剩余液體，并將吸附柱放置在室溫環境下；

(9)將吸附柱放入干凈的離心管中，向吸附柱上的吸附膜的中心滴加洗脫緩沖液EB，在室溫下放置后進行離心處理，收集DNA樣品；

所述步驟(4)中的結合液LN包含異丙醇和組合液，所述異丙醇和組合液的體積比為1：1；所述組合液中包含有Tris-HCl、Na₂EDTA、鹽酸胍以及Tween20，且每1000ml組合液中Tris-HCl的濃度為50-100mM、Na₂EDTA的濃度為1-10mM、鹽酸胍的濃度為4-6M、Tween 20的含量為50-100ml；

所述步驟(2)中的Buffer A包含Tris-HCl、Na₂EDTA、NaCl、SDS以及PVP40；且每1000mlBuffer A中Tris-HCl的濃度為50～100mM、Na₂EDTA的濃度為10～50mM、NaCl的濃度為200～500mM、SDS的體積比為0.5％～2％、PVP40的體積比為1％～2％；所述步驟(3)中的BufferB是濃度為3-5M的醋酸鉀溶液；

所述步驟(5)中的平衡液LB包含有Nacl、MOPS、異丙醇以及Triton-100，且每1000ml的平衡液LB中Nacl的濃度為500～800mM、MOPS的濃度為30～80mM、異丙醇的含量為100-200ml、Triton-100的含量為1-2ml；所述步驟(7)中使用的漂洗液PW每1000ml含有700～800ml的無水乙醇；所述步驟(9)中的洗脫緩沖液EB是濃度為10-20mM的Tris-HCl溶液。

2.根據權利要求1所述的一種植物基因組DNA快速提取方法，其特征在于，所述步驟(4)中加入的結合液LN的體積為上清液體積的2倍。

3.根據權利要求1所述的一種植物基因組DNA快速提取方法，其特征在于，所述Tris-HCl的PH值為7.5-8.5。

4.根據權利要求1所述的一種植物基因組DNA快速提取方法，其特征在于，所述步驟(2)中的水浴溫度為70℃，水浴時間為10～30min。