[發(fā)明專利]一種金納米粒子-石墨烯量子點手性二聚體的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710791139.6
• 申請日: 2017-09-05
• 公開（公告）號: CN107737944B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊蕾
• 申請（專利權(quán)）人: 泗縣飛虹體育文化發(fā)展有限公司
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816
• 代理公司: 合肥東邦滋原專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34155
• 代理人: 李蕾

1.一種金納米粒子-石墨烯量子點手性二聚體的制備方法，其特征在于包括18nm金納米粒子的合成，5nm石墨烯量子點的合成，金納米粒子和石墨烯量子點分別修飾互補的DNA分子，金納米粒子和石墨烯量子點形成二聚體結(jié)構(gòu)，二聚體的透射電子顯微鏡表征和手性信號的測定；

所述的18nm金納米粒子的合成步驟為：首先將200mL的錐形瓶用王水浸泡過夜，然后用超純水清洗干凈，加入95.5mL超純水于錐形瓶中，再加入2.5mL質(zhì)量濃度為0.4%的氯金酸溶液，將其置于加熱磁力攪拌器上加熱至沸騰，持續(xù)沸騰15min后，再在加熱攪拌的狀態(tài)下迅速加入2mL質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸三鈉溶液，待溶液由無色變?yōu)榫萍t色后持續(xù)加熱5min，停止加熱后繼續(xù)攪拌至溶液冷卻至室溫；

所述的5nm石墨烯量子點的合成步驟為：將氧化石墨烯在氮氣保護的作用下300℃加熱3h，從而得到熱還原的石墨烯片，稱取80mg石墨烯片加入到含有10mL濃H₂SO₄和30mL濃HNO₃的混合酸溶液中過夜超聲，加入500mL的蒸餾水稀釋，用0.22μm的微孔濾膜過濾除去酸溶液，再用蒸餾水清洗3次，最后將濾餅用50mL超純水重懸，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.0，將其置于高壓反應(yīng)釜中，200℃的條件下加熱反應(yīng)12h，冷卻至室溫后，將溶液再次用0.22μm的微孔濾膜過濾除去大塊的石墨烯片，收集濾液，將濾液避光條件下透析3次，從而得到石墨烯量子點溶液；

所述的金納米粒子修飾DNA1的步驟為：將新合成的金納米粒子在8000r/min的條件下離心7min，然后用pH7.2的0.01M PBS緩沖液將金納米粒子進行重懸，并濃縮兩倍，測得金納米粒子的濃度為10nM，然后加入終濃度為30nM的DNA1，在室溫下孵育6h后，將納米粒子在7000r/min的條件下離心10min，去除上清，用pH8.0的0.01M TE緩沖液將納米粒子進行重懸，得到DNA1修飾的金納米粒子；

DNA1的序列為：5’-NH₂-AAAAAATGGCATGCC-3’；

所述的石墨烯量子點修飾DNA2的步驟為：將5nm石墨烯量子點在12000r/min的條件下離心10min，然后用pH6.5 0.01M MES緩沖液將石墨烯量子點重懸，測得石墨烯量子點的濃度為10nM，然后加入N-羥基琥珀酰亞胺和碳二亞胺，使得石墨烯量子點、N-羥基琥珀酰亞胺、碳二亞胺反應(yīng)的摩爾比為1: 400:1000，在室溫下振蕩反應(yīng)2h使得石墨烯量子點的羧基進行活化，然后離心去除上清，用pH7.2的0.01M PBS緩沖液將石墨烯量子點進行重懸，加入DNA2使得其終濃度為30nM，在室溫下振蕩反應(yīng)4h后，12000r/min的條件下離心10min，用pH8.0的0.01M TE緩沖液將納米粒子進行重懸，得到DNA2修飾的石墨烯量子點；

DNA2的序列為：5’-NH₂-AAAAAGGCATGCCAT-3’；

所述的金納米粒子和石墨烯量子點形成二聚體結(jié)構(gòu)的步驟為：將制備的DNA1修飾的金納米粒子和DNA2修飾的石墨烯量子點等體積混合，在室溫下孵育2h，使得金納米粒子上的DNA1和石墨烯量子點上的DNA2互補雜交。