[發明專利]Necrostatin?1在治療神經退行性眼病藥物中的應用

在審

• 申請號: 201710790019.4
• 申請日: 2017-09-05
• 公開（公告）號: CN107519165A
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發明（設計）人: 柳夏林;何嫦;黃梓敬
• 申請（專利權）人: 中山大學中山眼科中心
• 主分類號: A61K31/4178
• 分類號: A61K31/4178;A61P27/02;A61P25/00
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司44100
• 代理人: 劉菁菁

技術領域

本發明涉及生物和醫藥技術領域，尤其涉及特異性抑制劑在眼病治療中的應用。

背景技術

視網膜神經退行性疾病是一類以光感受器或視網膜色素上皮細胞變性、死亡為主要病理改變的難治性眼病，主要包括視網膜色素變性、老年性黃斑變性等，是典型的神經退行性變，最終導致不可逆視功能喪失，嚴重影響人類生活適量。

神經炎癥是視網膜神經退行性疾病的重要病理基礎。在視網膜色素變性、老年性黃斑變性等視網膜神經退行性疾病中，普遍存在異常活躍的視網膜炎癥反應：免疫細胞功能紊亂引發異常免疫應答、炎癥因子大量釋放，促進神經元的損傷和變性，損害視功能。

目前視網膜神經退行性疾病的治療嘗試包括：基因治療、干細胞移植等，但是臨床上尚未有確切療效的治療方法，其中一個重要原因是這些治療易誘發和加重組織炎癥，導致神經細胞變性、死亡。調控神經炎癥成為治療視網膜神經退行性疾病的一個重要治療策略，但神經炎癥的來源和發生機制尚不明確。

程序性壞死是一種主動的按照一定程序發生的新型細胞死亡過程，與炎癥密切相關。程序性壞死的發生依賴受體相關蛋白激酶-1(RIP1)和RIP3的激活，從而向細胞下達死亡指令，引起細胞胞膜溶解、釋放炎性介質，如損傷相關模式分子(DAMPs)、核轉錄因子(NF-κB)等，導致炎性損傷。調控程序性壞死介導的炎癥反應成為治療視網膜神經退行性疾病的一種新思路和新方向。

5-(1H-Indol-3-ylmethyl)-3-methyl-2-thioxo-4-Imidazolidinone，即Necrostatin-1，是程序性壞死的特異性抑制劑，分子量為259.33，屬于生物堿類物質。它主要是通過特異性阻斷RIP1的磷酸化從而抑制細胞程序性壞死。

Necrostatin-1在心腦血管疾病動物模型中被證實具有良好的治療或緩解作用。如Necrostatin-1可減少小鼠腦中動脈栓塞所致的腦梗死面積；可有效減輕急性心肌缺血再灌注所致的心肌損傷。干預程序性壞死在心肌缺血、腦血管疾病動物模型中顯現出強大的治療潛能，成為心血管疾病患者的福音。機制上，主要認為Necrostatin-1通過抑制組織實質細胞(如神經元、心肌細胞)的程序性壞死，保護其存活并發揮功能。目前研究尚未報道Necrostatin-1在治療神經退行性眼病中發揮積極的作用。我們首次發現Necrostatin-1可有效治療神經退行性眼病，其機理是通過Necrostatin-1抑制免疫細胞(非實質細胞)的程序性壞死，從而減少免疫細胞因程序性壞死而產生和釋放的炎癥因子，減輕組織的炎癥反應，從而發揮治療效應。

發明內容：

本發明的目的是提供一種有效的治療神經退行性疾病的藥物。

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：

Necrostatin-1在制備治療神經退行性眼病藥物中的應用。

Necrostatin-1的給藥濃度為0.5-2.0毫摩爾/升。優選地，Necrostatin-1的給藥濃度為1.0毫摩爾/升，是將Necrostatin-1溶于磷酸鹽緩沖液而獲得。

Necrostatin-1的給藥方式為玻璃體腔內給藥。

本發明將Necrostatin-1用于治療視網膜色素變性，并通過模型建立進行以下效果評價：(1)視覺電生理檢查；(2)視網膜病理切片觀察；(3)免疫熒光染色、western blot、qPCR等分子生物學技術檢測。

本發明通過實驗證明：對視網膜色素變性小鼠進行玻璃體腔內注射Necrostatin-1治療后，小鼠的視網膜電圖(ERG)波形振幅提高，視功能得到改善。

本發明通過實驗證明：對視網膜色素變性小鼠進行玻璃體腔內注射Necrostatin-1治療后，小鼠的視網膜厚度增加。

本發明通過實驗證明：對視網膜色素變性小鼠進行玻璃體腔內注射Necrostatin-1治療后，小鼠視網膜神經細胞的死亡數量明顯減少，神經細胞的存活增加。

本發明通過實驗證明：對視網膜色素變性小鼠進行玻璃體腔內注射Necrostatin-1治療，能有效減少RIP1和RIP3表達，抑制視網膜程序性壞死。

本發明通過實驗證明：對視網膜色素變性小鼠進行玻璃體腔內注射Necrostatin-1治療，能有效減少視網膜小膠質細胞發生程序性壞死的數量。

本發明通過實驗證明：對視網膜色素變性小鼠進行玻璃體腔內注射Necrostatin-1治療后，小鼠視網膜組織炎癥因子TNF-α、CCL2的mRNA水平下降。