[發明專利]基于Taqman探針的慢性腎臟病相關基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒及其應用有效
| 申請號： | 201710784821.2 | 申請日： | 2017-09-04 |
| 公開（公告）號： | CN107326093B | 公開（公告）日： | 2020-01-21 |
| 發明（設計）人： | 劉必成;周樂汀;雷向東 | 申請（專利權）人： | 東南大學;上海境象生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 32204 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) | 代理人： | 孫斌 |
| 地址： | 210096*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 檢測 慢性腎臟病 探針 相關基因 擴增 引物 熒光定量PCR試劑盒 熒光定量PCR 一步法試劑 發病基因 非特異性 快速檢測 內參基因 一步完成 熒光定量 熒光信號 逆轉錄 試劑盒 單管 管蓋 靈敏 取材 雜交 基因 應用 | ||
1.一種基于Taqman探針的慢性腎臟病相關基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒，其特征在于，包括檢測VIM基因的上下游引物及探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO 1-3所示；檢測BCL2基因的上下游引物及探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO 4-6所示；檢測PODLX基因的上下游引物及探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO 7-9所示；檢測TGFB1基因的上下游引物及探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO 10-12所示；檢測B2M內參基因的上下游引物及探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO 13-15所示。
2.根據權利要求1所述的基于Taqman探針的慢性腎臟病相關基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒，其特征在于，所述PCR試劑盒還包括PCR酶混合液和MasterMix。
3.根據權利要求1-2任一所述的基于Taqman探針的慢性腎臟病基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒，其特征在于，所述探針5’端標記的熒光報告基團是FAM，3’端連接淬滅基團。
4.根據權利要求3所述的基于Taqman探針的慢性腎臟病相關基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒，其特征在于，所述淬滅基團為BHQ 1非熒光淬滅基團。
5.一種權利要求1所述的基于Taqman探針的慢性腎臟病相關基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒在制備分別檢測基因VIM、BCL2、PODLX和TGFB1試劑盒中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述檢測基因時PCR反應體系為10ul，包括提取的樣本RNA 1ul，上下游引物和探針混合液3.5ul，PCR酶混合液0.5ul，MasterMix 5ul。
7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述檢測基因時熒光定量PCR反應條件為：42℃ 5min；95 ℃ 10min；95℃ 20s；60℃ 退火/延伸45s，循環45次；40℃冷卻30 s。
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