[發明專利]一種抗人CD79a胞外端蛋白的抗體、編碼基因及應用

有效

• 申請號: 201710781135.X
• 申請日: 2017-09-01
• 公開（公告）號: CN107488230B
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 沈紅強;舒強
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;A61K47/68;A61K31/537;A61K38/07;A61P35/02;A61P37/02
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

本發明公開了一種抗人CD79a胞外端蛋白的抗體、編碼基因及應用。本發明以人B細胞淋巴瘤Raji細胞株作為免疫原免疫小鼠，獲取脾細胞后與小鼠骨髓瘤細胞融合獲得雜交瘤細胞，再經篩選獲得特異性針對人CD79a胞外端蛋白的單克隆抗體，經序列分析獲得了所得單克隆抗體的氨基酸序列，并分析獲得了重鏈和輕鏈的可變區序列及CDR序列，通過克隆表達的嵌合抗體也能夠有效且特異性識別人CD79a胞外端蛋白，且抗體作用于人B淋巴細胞時內化率高，具有良好的用于制備靶向B淋巴細胞的靶向藥物的前景，可以用于治療B淋巴細胞相關的疾病。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種抗人CD79a胞外端蛋白的抗體、編碼基因及應用。

背景技術

B細胞抗原識別受體(BCR)是B細胞表面最主要的分子，它由一個識別和結合抗原的mIg和兩個傳遞抗原刺激信號的CD79a/CD79b(又稱Igα/Igβ)異源二聚體構成。B細胞分子CD79a/CD79b，是免疫球蛋白超家族成員，分子量分別為45kDa、33kDa和37kDa，其分別有胞膜外區、跨膜區和胞質區。胞膜外區結構屬IgSF，分別有1個C2樣區和V樣結構域，跨膜區都有一個谷氨酸。CD79a和CD79b跨膜區帶負電的谷氨酸或谷氨酰胺與mIgM重鏈跨膜區帶正電的氨基酸可形成鹽橋，穩定BCR復合物。兩種CD79分子的胞質區均有一個免疫受體酪氨酸活化基序(ITAM)，抗原結合mIg誘導CD79-ITAM的酪氨酸殘基磷酸化，通過募集并活化下游信號分子Syk及Lyn等，沿著Btk、PLC-γ2和PI3K這3條主要途徑活化，從而介導由BCR途徑的信號轉導。因此，CD79在B細胞的免疫應答過程中起重要作用，近年來已越來越引起醫學研究人員的注意。

淋巴瘤是起源于淋巴造血系統的惡性腫瘤，嚴重危害人類健康的疾病，早在20世紀70年代前，淋巴瘤被認為是不治之癥，其病死率幾乎是100％。隨著世界各國對淋巴瘤診療的深入研究，新的抗腫瘤藥物的不斷問世和造血干細胞移植的實施，淋巴瘤的預后已經有了明顯的改善。但嚴重的毒副作用仍然是臨床成功治療淋巴瘤的主要障礙，且復發耐藥的病例缺乏藥物選擇，給治療帶來了極大的困難。近年來隨著分子生物學及抗體工程技術的進步，只殺傷腫瘤細胞而不損傷正常細胞的淋巴瘤靶向治療得到了廣泛的關注和發展，其中單克隆抗體(單抗)導向的靶向治療是該領域的主要方向。與化療比較，單克隆抗體靶向治療具有良好的選擇性和特異性，它們只殺傷表達靶分子的細胞，而不損傷無靶分子表達的血細胞成分和組織器官細胞，從而可大大提高靶向治療的特異性，降低藥物的全身毒副作用。有效的靶向治療取決于良好的先導分子，系列特異性表面分化抗原單抗作為先導分子，抗體偶聯藥物(antibody-drug conjugate，ADC)將藥物或毒素特異地帶到腫瘤細胞膜上或細胞內，或通過完整抗體激活補體(CDC)或通過抗體介導細胞毒(ADCC)作用以達到殺滅腫瘤細胞的目的，有著無可替代的優勢，有理由相信抗體偶聯藥物擁有美好未來，下一代連接子、偶聯技術以及新的靶點都是創新的機遇。Rituximab(商品名：美羅華)是美國FDA批準用于腫瘤治療的第一個單抗藥物，是一種非結合型人鼠嵌合型CD20單抗，其作用靶點是CD20抗原，主要在前B細胞和成熟B細胞上表達，95％以上B系非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)病例淋巴瘤細胞上呈高表達，在成人B系NHL治療中取得令人滿意的療效。除了CD20和CD19外，在對B細胞系腫瘤如慢性淋巴細胞白血病(B-CLL)及非何杰金淋巴瘤(NHL)的治療中，針對B細胞受體(BCR)的研究成為熱點，抗CD79b抗體-藥物偶聯物(polatuzumab vedotin)靶向CD79b⁺的B細胞已證明亦是一個有效的治療靶點，尤其對針對復發及難治的B細胞淋巴瘤。因此，探索抗體靶向治療惡性血液病是當前研究熱點。在靶向藥物的研究中，為了提高靶向藥物對靶細胞的選擇性殺傷，減少對非靶向組織的毒副作用，確定一個特異性強的單抗是首要問題。