[發明專利]王不留行黃酮苷在制備抗血管鈣化藥物中的應用

在審

• 申請號: 201710761223.3
• 申請日: 2017-08-30
• 公開（公告）號: CN107349215A
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發明（設計）人: 邱麗穎;孫海建;朱雪雪;龔蕾蕾;蔡維維;周躍濤
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: A61K31/7048
• 分類號: A61K31/7048;A61P9/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及抗血管鈣化中藥開發，具體設計王不留行黃酮苷在制備抗血管鈣化藥物中的應用，屬中藥藥物開發領域。

背景技術

血管鈣化是一種常見的血管病變，與骨發育過程相似，其病理表現主要為血管壁的鈣磷過度沉積，導致血管壁僵硬性增加和血管順應性下降，進而引起心肌缺血缺氧，左心室肥大和心力衰竭，引發血栓形成和板塊破裂，血管鈣化是心腦血管疾病高死亡率的主要因素。血管鈣化受到包括代謝、炎癥、氧化應激、凋亡等多種因素的調控，血管鈣化是動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、慢性腎病、衰老和血管損傷等心血管疾病的共同病理表現。臨床研究發現80％的血管損傷和90％的冠脈疾病中均存在血管鈣化，血管鈣化是心血管事件和腦卒中的預警指標，但血管鈣化的發病機制目前尚未完全闡明，有效預防和治療血管鈣化是將成為21世紀醫療衛生事業的主要挑戰。

中藥是我國的寶貴資源之一，研究發現傳統一些中藥在防護血管鈣化中發揮一定的作用，但深入探索和篩選具有抗血管鈣化的中藥仍然是任重道遠的巨大任務，闡明中藥開血管鈣化其作用機制并研究和開發這些中藥具有重要的臨床意義。我們多年來一直從事王不留行的研究，王不留行為石竹科植物麥藍菜Vaccaria Segetalis(Neck.)Garcke的干燥成熟種子，是一種常見的中藥，具有活血通經、下乳消腫等功效。王不留行主要含有刺桐堿、三萜皂苷、黃酮苷、類脂、環肽、脂肪酸和單糖等成分，王不留行黃酮苷(Vaccarin,VAC)是王不留行的主要有效成分，本實驗室研究發現不留行黃酮苷具有促進血管新生，對抗高糖和氧化應激的引起的內皮細胞損傷，降低血壓和保護高血壓腎病，改善糖尿病脂質代謝紊亂，加快開放性創傷的愈合速度，提示王不留行黃酮苷可能具有心血管保護作用，但目前尚未有報道王不留行黃酮苷在制備抗血管鈣化藥物中的作用。

發明內容

本發明要解決的是為現有的抗血管鈣化藥物制備技術領域提供一種新的途徑，提供王不留行黃酮苷在抗血管鈣化藥物中的作用，因此本研究提供的技術方法是將王不留行黃酮苷應用于制備治療血管鈣化的藥物。

本發明的有益效果是：王不留行黃酮苷改善血管鈣化，將王不留行黃酮苷應用到血管鈣化相關藥物的開發中，以制備更好的抗血管鈣化的新思路，不僅拓展了抗血管鈣化藥物的選擇，也為我國抗血管鈣化中藥的篩選提供的新的策略和思路。

附圖說明

圖1：王不留行黃酮苷(VAC)對血管平滑肌細胞(VSMCs)鈣化的影響。

圖2：王不留行黃酮苷(VAC)對血管平滑肌細胞(VSMCs)鈣化相關蛋白Runx-2和BMP-2的影響。

圖3：王不留行黃酮苷(VAC)對血管鈣化大鼠模型血管鈣離子沉積和ALP活性的影響。

圖4：王不留行黃酮苷(VAC)對血管鈣化大鼠模型的血管鈣化相關關蛋白Runx-2和BMP-2的影響。

具體實施方式

實施例1血管鈣化模型的復制

血管鈣化模型大鼠制作方法：參考國內外權威期刊，我們采用8周齡雄性SD大鼠肌肉注射維生素D330萬單位/kg，同時灌胃尼古丁25mg/kg，9h后再重復給予尼古丁1次，2周后再次給予肌肉注射維生素DB 30萬單位/kg，4周后大鼠出現廣泛的血管鈣化。

實施例2實驗分組及王不留行黃酮苷(VAC)干預

將8周齡的SD大鼠隨機分三組：

(1)正常對照-生理鹽水組：為正常對照組，始終給予正常飲食和飲水，2周后給予生理鹽水皮下灌注2周作為王不留行黃酮苷(VAC)的對照；

(2)血管鈣化組-生理鹽水組采用維生素D3聯合尼古丁方法引起血管鈣化，2周后給予生理鹽水(saline)腹腔注射2周作為王不留行黃酮苷(VAC)的對照；

(3)血管鈣化-黃酮苷組(10mg/kg)：采用維生素D3聯合尼古丁方法引起血管鈣化，2周后給予王不留行黃酮苷(VAC，10mg/kg)腹腔注射2周。

實施例3 von Kossa染色和Alizarin red S染色

參考國內外權威文獻，戊巴比妥鈉麻醉大鼠，打開胸腔、暴露心臟，經左心室插管至升主動脈，夾壁腹主動脈，左心耳剪開一小出口，快速灌注0.01M PBS(37℃)沖洗至流出液清亮后再灌注預冷(4℃)的4％多聚甲醛固定(先快后慢，在大鼠肢體伸展后減慢速度)。取出胸主動脈，置于4℃的4％多聚甲醛后固定24h，脫水，石蠟包埋，切片，進行常規von Kossa染色和Alizarin red S染色。

實施例4原代血管平滑肌細胞培養及鈣化培養基誘導