[發(fā)明專利]一種馬紅球菌及其鑒定方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710760630.2
• 申請(qǐng)日: 2017-08-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109423455B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許科偉;顧磊;楊帆;湯玉平;榮發(fā)準(zhǔn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)石油化工股份有限公司;中國(guó)石油化工股份有限公司石油勘探開(kāi)發(fā)研究院
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12Q1/64;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京聿宏知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;方莉

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域的一種馬紅球菌及其鑒定方法和應(yīng)用。該馬紅球菌16S rDNA的基因序列如SEQ ID NO.1所示，菌株為SINOPEC05在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號(hào)為CCTCC NO：M2016109。該菌株在油氣藏上方土壤中的豐度與油氣藏上浮氣態(tài)烴濃度呈正相關(guān)，可用作油氣微生物，指示油氣藏上方烴類滲漏高值區(qū)域。同時(shí)，該菌株在油氣藏上方土壤中的豐度較高，無(wú)需擴(kuò)增培養(yǎng)，通過(guò)改進(jìn)的引物即可對(duì)土壤中的馬紅球菌SINOPEC05的16S rDNA保守序列進(jìn)行擴(kuò)增，可準(zhǔn)確、高效地判斷油氣藏上浮氣態(tài)烴的濃度，解決了傳統(tǒng)生理生化檢測(cè)周期長(zhǎng)，對(duì)樣品培養(yǎng)物純度要求高的不足。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種馬紅球菌及其鑒定方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

微生物勘探技術(shù)的核心是油氣指示微生物的鑒定。通常情況下勘探過(guò)程中所 研究的目標(biāo)微生物在環(huán)境中的相對(duì)豐度很低，因此需在傳統(tǒng)的特異培養(yǎng)條件下刺 激油氣藏環(huán)境與非油氣藏環(huán)境中烴類氧化細(xì)菌的快速繁殖。上述方法雖然可以獲 得微生物的數(shù)量信息，但是該數(shù)量信息事實(shí)上成幾何倍數(shù)地高于原位環(huán)境中的微 生物數(shù)量，不可避免地掩蓋了油氣藏與非油氣藏環(huán)境中微生物數(shù)量上的差異，同 時(shí)也無(wú)法獲得不可培養(yǎng)微生物的信息。另外，油氣微生物的生長(zhǎng)除受烴類影響， 還會(huì)受到周圍環(huán)境的影響，如土壤的濕度、pH值、鹽度或其中的關(guān)鍵離子、營(yíng) 養(yǎng)物質(zhì)和擾動(dòng)等。若微生物發(fā)育的相對(duì)強(qiáng)弱是由環(huán)境因素所引起，則會(huì)造成油氣 富集或貧乏的假象。

馬紅球菌(Rhodococcus equi)原稱為馬棒狀桿菌，曾歸于棒狀桿菌屬，但近 年來(lái)國(guó)外學(xué)者對(duì)其細(xì)胞壁進(jìn)行分析后，發(fā)現(xiàn)有些棒狀桿菌不符合棒狀桿菌屬的特 性，隨后被列入紅球菌屬。紅球菌屬在自然條件下可以在污染的環(huán)境中存活，因 此可作為生物去污的接種介體，并且利用紅球菌降解油污物已獲得了很好的效 果。在春光油田油氣藏上方土壤中發(fā)現(xiàn)馬紅球菌占較大的豐度，為了進(jìn)一步確定 該菌與油氣微生物勘探之間的關(guān)系，對(duì)其典型菌株的獲取及檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行開(kāi)發(fā)研 究。

目前，馬紅球菌的常見(jiàn)檢測(cè)鑒定方法有兩種：1.生理生化鑒定，通過(guò)分離出 的純菌，對(duì)微生物生理生化進(jìn)行定性研究，該方法周期長(zhǎng)且對(duì)培養(yǎng)物純度提出較 高的要求；2.基因提取后進(jìn)行16S rDNA的測(cè)序，該方法仍需獲取純培養(yǎng)物進(jìn)行 全基因提取，再通過(guò)通用16S rDNA引物獲取保守序列進(jìn)行測(cè)序。

因此，為了能夠快速、準(zhǔn)確獲取油氣田上方馬紅球菌的特征信息，急需對(duì)其 典型菌株的獲取及混合體系中的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行開(kāi)發(fā)研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足提供了一種馬紅球菌及 其鑒定方法，該菌株在油氣藏上方土壤中的豐度較高，且所述馬紅球菌在油氣藏 上方土壤中的豐度與油氣藏上浮氣態(tài)烴濃度呈正相關(guān)，因此該菌株可用作油氣微 生物，指示油氣藏上方烴類滲漏高值區(qū)域。

本發(fā)明還提供了一種利用所述馬紅球菌指示油氣藏上浮氣態(tài)烴濃度的方法， 該方法采用改進(jìn)的引物對(duì)所述馬紅球菌的16S rDNA保守序列進(jìn)行擴(kuò)增，根據(jù)擴(kuò) 增產(chǎn)物中目標(biāo)條帶的亮度，可準(zhǔn)確、高效地判斷油氣藏上浮氣態(tài)烴的濃度。

為此，本發(fā)明一方面提供了一種馬紅球菌，其16S rDNA的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

根據(jù)本發(fā)明，所述馬紅球菌的菌株為SINOPEC05，在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中 心的保藏號(hào)為CCTCC NO：M2016109。

根據(jù)本發(fā)明，所述馬紅球菌的生物學(xué)特征為：菌株在固體培養(yǎng)基上的菌落形 態(tài)為：在固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)為呈圓形、白色、扁平、光滑濕潤(rùn)、邊緣模糊， 在顯微鏡下的細(xì)胞呈多種形態(tài)、圓滑，革蘭氏染色反應(yīng)呈陽(yáng)性。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述的固體培養(yǎng)基為甲醇固體培養(yǎng)基或丁醇固 體培養(yǎng)基；具體地，所述的甲醇固體培養(yǎng)基的組成如下(1L去離子水中)：

和/或，所述的丁醇固體培養(yǎng)基的組成如下(1L去離子水中)：