[發明專利]一種檢測腦炎病毒的引物組合及應用、試劑盒

在審

• 申請號: 201710759502.6
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107299157A
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發明（設計）人: 劉嵐錚;楊國樑;韓秀云;呂燕;趙紅;王春榮;關恒云
• 申請（專利權）人: 濟南市疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 李進

技術領域

本發明涉及醫學檢驗領域，具體而言，涉及一種檢測腦炎病毒的引物組合及應用、試劑盒。

背景技術

病毒性腦炎(VE)已日益成為近代兒科最常見的中樞系統感染性疾病，呈全球性分布，常年散發，病情嚴重，且有死亡病例，嚴重危害著少年兒童的健康。其病死率及后遺癥發生率均較高。引起病毒性腦炎(Viral Encephalitis，VE)的病毒種類很多，由于病毒性腦炎病原的多元性，給臨床的診斷、治療和預防造成了一定困難。大約有100余種病毒可以引起中樞神經系統的急性感染，乙腦病毒腺病毒、腸道病毒皰疹病毒、流行性腮腺炎病毒和腺病毒等是病毒性腦炎的主要病原體。

目前，針對上述腦炎致病病毒的檢查多采用實驗室的方法進行檢測；傳統的實驗室檢測方法大多需要數周的時間才能獲得準確的結果，無法獲得及時的結果；因此，需要一種快速檢測的手段。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種檢測腦炎病毒的引物組合，該引物組合具有針對不同病原體實現同時無差異擴增，靈敏度高，體現良好的優點。

本發明的第二目的在于提供上述引物組合在制備檢測腦炎病毒的試劑盒中的應用。

本發明的第三目的在于提供一種檢測腦炎病毒的試劑盒。

本發明的第四目的在于提供上述檢測腦炎病毒的試劑盒在檢測腦炎病毒RNA中的應用。

為了實現本發明的上述目的，采用以下技術方案：

一種檢測腦炎病毒的引物組合，引物組合包括檢測腸道病毒的第1引物對、檢測乙腦病毒的第2引物對、檢測單純皰疹病毒的第3引物對中的至少一種以及通用引物對；第1-3引物對的堿基序列如SEQ ID No.1-6所示；通用引物對的堿基序列如SEQ ID No.7-8所示。

第1-3引物對的每條引物都由兩部分組成；a通用引物識別的標簽序列，b病原體基因特異性引物識別序列。

整個擴增過程由以下2個階段組成：(1)富集階段:第1-3引物對以比較低的濃度加入反應體系，低濃度的基因特異性引物被給予足夠的時間并在較高的退火溫度下去發現并結合模板，提高擴增的特異性。這一階段一般進行10個循環；(2)擴增階段:通用引物對以比較高的濃度加入反應體系，高濃度的通用引物無差異的高效地擴增所有的靶序列。該技術克服了不同引物退火溫度不一致的困難，實現擴增的無差異性。這一階段一般進行30個循環。

上述的引物組合在制備檢測腦炎病毒的試劑盒中的應用。

一種檢測腦炎病毒的試劑盒，試劑盒包括上述檢測腦炎病毒的引物組合。

上述的檢測試劑盒在檢測病毒RNA中的應用。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：本發明提供的檢測腦炎病毒的引物組合能準確地、特異地檢測出病毒的種類；將上述引物組合應用于制備檢測試劑盒，可以方便、快速、高效的檢查應用于檢測；通過巢式PCR的方法，將試劑盒應用于檢測，提高檢測的效率。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為本發明實驗例1提供的樣本電泳檢測結果圖；

圖2為本發明實驗例1提供的樣本電泳檢測結果圖。

具體實施方式

下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發明，而不應視為限制本發明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。

下面對本發明實施例的一種檢測腦炎病毒的引物組合及應用、試劑盒進行具體說明。

一種檢測腦炎病毒的引物組合，引物組合包括檢測腸道病毒的第1引物對、檢測乙腦病毒的第2引物對、檢測單純皰疹病毒的第3引物對中的至少一種，以及通用引物對；第1-3引物對的堿基序列如SEQ ID No.1-6所示；通用引物對的堿基序列如SEQ ID No.7-8所示。

進一步地，第1-3引物對和通用引物對包括上游引物和下游引物；第1-3引物對的上游引物序列包括通用引物的上游引物序列，第1-3引物對的下游引物序列包括通用引物的下游引物序列。

檢測腸道病毒第1引物對的上游引物序列如下所示：