[發明專利]一種利用SSR分子標記鑒定栽培茄與野生茄種間雜交F1

有效

• 申請號: 201710759409.5
• 申請日: 2017-08-30
• 公開（公告）號: CN107447012B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 楊旭;劉飛;張宇;成玉富
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 戴朝榮;鄭慧娟

1.一種利用SSR分子標記鑒定栽培茄與野生茄種間雜交F₁雜種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：種間雜交F₁雜種及其親本的DNA提取；

步驟二：建立SSR反應體系及擴增反應程序：利用SSR標記引物emg01J09和emh21J12進行雜種鑒定，所述雜種為：迷你茄×赤茄、蘇州牛角×赤茄、西安綠茄×旋花茄、迷你茄×紅茄、迷你茄×旋花茄或蘇州牛角×旋花茄的F₁雜交后代，引物emg01J09-F具有SEQID NO.1的核苷酸序列；引物emg01J09-R具有SEQID NO.2的核苷酸序列；引物emh21J12-F具有SEQIDNO.3的核苷酸序列；引物emh21J12-R具有SEQID NO.4的核苷酸序列；

步驟三：聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測；

步驟四：雜交種真實性的鑒定；在雜交后代的擴增產物中，是否具有父母本互補型或父本型條帶，若有則為真雜交種，反之，則為假雜交種。

2.如權利要求1所述的利用SSR分子標記鑒定栽培茄與野生茄種間雜交F₁雜種的方法，其特征在于，步驟一中，以親本和雜交種植株的葉片為材料，提取DNA；提取的DNA用1%的瓊脂糖凝膠電泳進行純度的檢測。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述DNA樣品置于-20℃保存。

4.如權利要求1所述的利用SSR分子標記鑒定栽培茄與野生茄種間雜交F₁雜種的方法，其特征在于，步驟二中，所述SSR反應體系：6.7μl ddH₂O，1.0μl 10×Buffer，0.2μl dNTPs，1.0μl 引物，0.1μl rTaq聚合酶、1.0μl DNA模板。

5.如權利要求1所述的利用SSR分子標記鑒定栽培茄與野生茄種間雜交F₁雜種的方法，其特征在于，步驟二中，擴增反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性5min，55~60℃退火30s，72℃延伸45s，進行35個循環；最后72℃充分延伸10min，4℃保存。

6.如權利要求1所述的利用SSR分子標記鑒定栽培茄與野生茄種間雜交F₁雜種的方法，其特征在于，步驟三中，電泳檢測具體步驟為：擴增產物在6%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，每個樣品取1.4μl和0.7μl Loading Buffer混合點樣，以DL500 DNA Maker為對照，在180V恒壓下，電泳1.5h，隨后進行銀染觀察。

7.如權利要求6所述的利用SSR分子標記鑒定栽培茄與野生茄種間雜交F₁雜種的方法，其特征在于，銀染具體步驟如下：

(1) 用自來水將電泳槽和四塊玻璃板沖洗干凈，放在操作臺上自然蒸干；

(2) 按照長板外短板內的順序，將玻璃板垂直安裝到電泳槽上，擰緊；然后用1.0%瓊脂膠封住底部，待用；

(3) 將模具傾斜45°，用搖晃均勻后的6%聚丙烯酰胺凝膠，緩緩倒入玻璃板的縫隙，至模具頂部為止；隨后迅速插上梳子，仔細觀察是否有氣泡殘留，確定好后，室溫放置1~2h進行凝固；

(4) 凝固好后，放到加滿1×TBE電泳緩沖液的電泳槽中，小心地拔出梳子，避免氣泡產生，隨后點樣，然后進行電泳；

(5) 結束后，緩緩倒出緩沖液，取下膠板，從玻璃板中取出凝膠，先放入固定液中輕搖2~3min；在染色液中輕晃3~5min；再在蒸餾水中漂洗2~3次，每次時間不超過15s；隨后放到顯影液中輕輕搖晃，直至條帶出現；最后觀察后拍照分析。