[發明專利]一種高效制作植物葉盤的打孔裝置及方法

在審

• 申請號: 201710758190.7
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107379110A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 曾婉俐;向海英;張建鐸;高茜;張濤;李雪梅;陳章玉
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: B26F1/32
• 分類號: B26F1/32
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司53100
• 代理人: 金耀生

技術領域

本發明涉及一種用于高效制作植物葉盤的打孔裝置及方法。

背景技術

根癌農桿菌介導的轉化法是目前應用最廣泛的植物轉基因方法，由根癌農桿菌介導的轉化法操作簡單、費用低、效率高、插入片段確定性好、轉基因拷貝數低，因此已經成為轉基因策略中的首選方法。在已獲得的近 200 種轉基因植物中約80％是由根癌農桿菌介導完成的[王關林,方宏筠.植物基因工程[M]. 北京:科學出版社,2002:452-453]。

在根癌農桿菌介導的植物轉基因過程中，為了提高轉化效率，需要對無菌的植物葉片進行損傷處理。目前常用的方法是用打孔器將植物葉片制作成葉盤，之后根癌農桿菌在葉盤邊緣的傷口處附著，實現根癌農桿菌介導的轉基因。

用打孔器制作葉盤時，由于需要手動將制作好的葉盤用細鐵絲推出，因此容易污染無菌的葉盤；并且當植物葉片表面分泌物較多時，制作好的葉盤易黏連，不易分成單個平鋪培養。目前，隨著部分模式植物全基因組測序的完成，植物基因功能的研究已發展到了全基因組功能研究時代，需要進行大規模的遺傳轉化，研究基因功能，因此急需開發一種能夠高效完成植物葉盤制作并且不易污染的打孔裝置。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于高效制作植物葉盤的打孔裝置及方法，為根癌農桿菌介導的大規模遺傳轉化提供技術支持。

本發明技術方案為：

一種高效制作植物葉盤的打孔裝置包括：操作桿、操作手柄、外殼、葉盤成型孔和葉盤暫存腔、彈簧；操作手柄與外殼連接為一體，操作桿置于外殼內，操作桿下部置放彈簧，操作桿可穿過彈簧，彈簧下方是葉盤成型管，管內腔為葉盤暫存腔，彈簧上下部位的外殼上設置上部彈簧卡口和下部彈簧卡口。

基于此裝置，本發明的用于高效制作植物葉盤的方法按以下步驟進行 ： 步驟一：將本發明的用于高效制作植物葉盤的裝置組裝完畢進行高壓滅菌，并在烘箱中烤干備用； 步驟二：將培養好的植物無菌組培苗在超凈工作臺中取出，用無菌的剪刀剪下葉片置于無菌的濾紙上；

步驟三：用葉盤成型孔對植物葉片進行打孔；

步驟四：制作好的葉盤可暫時貯存于葉盤暫存腔內；待該腔內葉盤存滿，則使用操作桿向下按壓，使彈簧向下收縮，操作桿深入葉盤暫存腔將葉盤打出到無菌濾紙上；

步驟五：將濾紙上制作好的葉盤分離成單個，平鋪于培養基上培養。

由于某些植物葉片表面分泌物多，形成的葉盤會黏連在一起，不易分離開，因此在步驟四進時，可以每次只制作一個葉盤，之后直接將葉盤打出平鋪于培養基上培養。

相比于傳統的打孔器，本發明的裝置將推出葉盤的操作桿和彈簧置于葉盤暫存腔上部，解決了傳統打孔器反復移動細鐵絲推出葉盤造成污染的問題；同時，本發明也可以對易黏連的葉盤采取制作一個推出一個平鋪到培養基上進行培養，方便快捷，不易污染。

通過實際操作證實本發明可以解決易污染和制作易黏連葉盤的低效率問題為根癌農桿菌介導的植物進行大規模的遺傳轉化提供技術支持。

實際應用表明，本裝置完全達到設計要求。 附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這個附圖獲得其他的附圖。

圖 1 為本發明的葉盤打孔裝置結構示意圖。 圖中：1－操作桿，2－操作手柄，3－外殼，4－上彈簧卡口，5－彈簧，6-下彈簧卡口，7-葉盤暫存腔，8-葉盤成型管孔。

具體實施方式

下列實施例僅用于說明本發明，而不應視為限定本發明的范圍。實施例中未注明具體技術或條件者，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過購買獲得的常規產品。

如圖 1 所示，本發明的高效制作植物葉盤的打孔裝置由操作桿1、外殼3結合構成，將彈簧5放入外殼3的空腔中，由外殼3底部的下部彈簧卡口6卡住彈簧，操作桿1放入外殼3中穿過彈簧5，由上部彈簧卡口4卡住操作桿，使用時握住操作手柄2，用鋒利的葉盤成型管孔8對準葉片制作大小固定的葉盤。

所述的葉盤成型管孔直徑為5mm。

所述的外殼直徑10mm，長度15cm。

所述的操作桿直徑4mm，長度16cm。

所述的彈簧高度為5cm。

所述的葉盤暫存腔高度為4cm。

本裝置由不銹鋼制成（不限于不銹鋼，可高壓滅菌即可），彈簧可市場購買（需要滿足可以滅菌，反復使用）。