[發(fā)明專利]一種牛樟芝菌絲體的培養(yǎng)方法

在審

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• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107586724A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發(fā)明（設計）人: 殷東林;梁仿世
• 申請（專利權）人: 殷東林;梁仿世
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司11385
• 代理人: 董芙蓉

技術領域

本發(fā)明涉及生物發(fā)酵技術領域，尤其涉及一種牛樟芝菌絲體的培養(yǎng)方法。

背景技術

牛樟芝(Antrodia camphorata)隸屬于擔子菌亞門，層菌綱，非褶菌目，多孔菌科，薄孔菌屬，是一種珍稀藥用真菌，素有“藥中之王”、“森林中之紅寶石”的美譽。牛樟芝主要生理活性成分為多糖和三萜類物質，其中牛樟芝多糖具有提高免疫力、抑制癌細胞、改善心血管循環(huán)系統(tǒng)、防止動脈硬化等功效作用。藥理研究表明牛樟芝三萜具有多種生物活性，如保肝、調節(jié)免疫、抑制血管新生、抗腫瘤、抗炎癥、抗氧化等。牛樟芝作為一種新發(fā)現(xiàn)的藥用真菌表現(xiàn)出廣闊的應用前景。由于野生牛樟芝生長緩慢，資源短缺，無法滿足社會需求。目前，人工培育牛樟芝技術尚未成熟，特別是工廠化生產牛樟芝的關鍵技術亟待突破，具有巨大的研究價值。

目前牛樟芝人工培育技術大致可以分為液體發(fā)酵法、固體培養(yǎng)法、椴木栽培法三種。液體發(fā)酵法：利用500公升甚至噸級以上的液體發(fā)酵罐進行牛樟芝樟芝菌種液體發(fā)酵以收取菌絲體；培養(yǎng)時間短，約七至十四天左右；但無法取得野生樟芝特有的三萜類。固體培養(yǎng)法：將牛樟芝樟芝菌種以太空包進行菌絲體培養(yǎng)。太空包含有纖維物、醣類、五谷雜糧類等；能獲得與野生牛樟芝樟芝外形相似但不一樣的成分，培養(yǎng)時間三個月以上；培養(yǎng)成本高。椴木栽培法：利用牛樟芝原有宿主牛樟樹椴木為培養(yǎng)基栽培牛樟芝；能獲得與野生樟芝相同之成分，功效相同，避免野生牛樟樹被盜伐；但培養(yǎng)時間長達2-3年，培養(yǎng)成本高。綜上所述的三種培育方法，存在以下的不足之處：1)采用液體發(fā)酵法生產出的牛樟芝菌絲體三萜類含量極低，藥用價值低；2)采用固體培養(yǎng)法生產牛樟芝菌絲體培養(yǎng)周期較長，易污染，成功率低，培養(yǎng)成本高；3)采用椴木栽培法生產與野生牛樟芝品質相當的產品，須采用牛樟木作為培植菌木。然而牛樟樹已列為中國臺灣珍稀樹種(一級保護)，原料來源十分困難，且牛樟樹的種植條件要求較高，生長周期長，工廠化生產受到限制。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明實施例提供了一種牛樟芝菌絲體的培養(yǎng)方法，主要目的是解決牛樟芝菌絲體培養(yǎng)周期長、成功率低及藥用價值低的問題。

為達到上述目的，本發(fā)明主要提供了如下技術方案：

一方面，本發(fā)明實施例提供了一種牛樟芝菌絲體的培養(yǎng)方法，所述方法包括以下步驟：

將牛樟芝菌種接種在斜面培養(yǎng)基上進行活化與提純，得到活化好的母種；

將所述活化好的母種接種到液體搖瓶培養(yǎng)基中進行靜置培養(yǎng)，待菌絲萌發(fā)且無污染后進行攪拌培養(yǎng)，獲得搖瓶種；

將所述搖瓶種接種到發(fā)酵培養(yǎng)基上進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到發(fā)酵菌絲體；

將所述發(fā)酵菌絲體作為液體菌種接種到人工合成固體培養(yǎng)基質上并發(fā)酵培養(yǎng)30-90天，得到樟芝菌絲體。

作為優(yōu)選，所述斜面培養(yǎng)基由以下原料組成：馬鈴薯100g/L-200g/L、葡萄糖 10g/L-20g/L、玉米粉10g/L-50g/L、蛋白胨2g/L-5g/L、硫酸鎂0.1g/L-1g/L、磷酸二氫鉀 0.2g/L-2g/L、VB₁10g/L-50mg/L、瓊脂粉16g/L-20g/L；所述將樟芝菌種接種在斜面培養(yǎng)基上進行活化與提純的培養(yǎng)溫度為25℃-30℃。

作為優(yōu)選，所述搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為25℃-33℃，所述搖瓶培養(yǎng)為靜置培養(yǎng)3-4天；所述攪拌培養(yǎng)是將搖瓶放置于磁力攪拌器上進行培養(yǎng)，所述攪拌培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為25℃-33℃，所述攪拌培養(yǎng)的培養(yǎng)時間為6-10天。

作為優(yōu)選，所述液體搖瓶培養(yǎng)基由以下原料組成：馬鈴薯汁10g/100mL-50g/100mL、葡萄糖1g/100mL-4g/100mL、玉米粉1g/100mL-5g/100mL、蛋白胨0.2g/100mL-1g/100mL、硫酸鎂0.01g/100mL-0.1g/100mL、磷酸二氫鉀0.02g/100mL-0.2g/100mL、VB₁0.001g/100mL-0.01g/100mL及瓊脂粉0.01g/100mL-0.2g/100mL。

作為優(yōu)選，所述發(fā)酵培養(yǎng)是在發(fā)酵罐中進行，所述發(fā)酵罐的罐壓為0.02Mpa-0.08Mpa；所述發(fā)酵培養(yǎng)的通氣量為1:0.2-2.0；

所述發(fā)酵培養(yǎng)的接種量為1％-10％，所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為25℃-33℃，所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)時間為3-13天。