[發(fā)明專利]檢測豬圓環(huán)病毒3型的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法的引物組

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710757261.1
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號(hào): CN107312875B
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳如敬;陳秋勇;吳學(xué)敏;車勇良;王晨燕;周倫江;嚴(yán)山;王隆柏;魏宏
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

本發(fā)明屬于動(dòng)物傳染病學(xué)檢測領(lǐng)域，本發(fā)明公開了一種檢測豬圓環(huán)病毒3型（Porcine circovirus 3，PCV3）的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法（LAMP）的引物組。該方法根據(jù)豬圓環(huán)病毒3型基因組保守序列設(shè)計(jì)引物兩對引物：外引物F3和B3；內(nèi)引物FIP和BIP。具體序列見SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4。根據(jù)所設(shè)計(jì)的引物建立一種檢測豬圓環(huán)病毒3型環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法。該檢測方法與豬常見傳染病病原不發(fā)生交叉反應(yīng)。本發(fā)明的檢測方法不需要昂貴儀器設(shè)備，便于現(xiàn)地使用，實(shí)用性強(qiáng)；準(zhǔn)確性高，特異性強(qiáng)，靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于檢測豬圓環(huán)病毒3型的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的引物組，屬于動(dòng)物傳染病學(xué)檢測領(lǐng)域。

背景技術(shù)

豬圓環(huán)病毒(Porcine circoviruses，PCV)是單股環(huán)狀的DNA病毒，基因組長度約為1.7kb長，是最小的動(dòng)物DNA病毒之一。已經(jīng)確定有兩種類型的PCV，即圓環(huán)病毒1型(PCV1)和圓環(huán)病毒2型(PCV2)。PCV1于1974年首次在PK細(xì)胞培養(yǎng)物中作為一種污染物鑒定，其對豬只沒有致病性。PCV2于1998年首次報(bào)道，其在臨床條件下能引起豬只的豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病(Porcine circovirus associated diseases，PCVAD)，主要引起仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征，肺炎、豬皮炎、腎病綜合征和繁殖障礙，主要表現(xiàn)為呼吸、泌尿、腸道、淋巴、心血管、神經(jīng)、繁殖系統(tǒng)以及皮膚的功能紊亂，對全世界的生豬養(yǎng)殖造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。2016年，一種新型的圓環(huán)病毒3型病毒（豬圓環(huán)病毒3型，porcine circovirus 3，PCV3）首先在美國報(bào)道，該病毒基因組長為2.0kb，其能引起豬的皮炎腎病終合癥、繁殖障礙及心臟和多系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)，對豬場疾病控制十分重要。臨床調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)PCV3和豬只繁殖障礙等疾病相關(guān)。大范圍的檢測發(fā)現(xiàn)，該病原可以在我國的八個(gè)省以及一個(gè)直轄市可以檢測到，因此，還需要對我國PCV3感染情況進(jìn)行全面的調(diào)查。通過對PCV3毒株全基因組和其部分基因的遺傳進(jìn)化研究發(fā)現(xiàn)，PCV3與PCV1和PCV2處于不同的進(jìn)化分支，屬于新型的豬圓環(huán)病毒（即PCV3）。結(jié)果還表明，我國PCV3毒株和美國PCV3毒株同源進(jìn)化關(guān)系很近，表明這些毒株可能有相同的進(jìn)化來源。目前，關(guān)于PCV3的致病性的研究較小，致病機(jī)理還未見明確。所以，建立一種簡單實(shí)用的檢測方法對PCV3的防控有著重要意義。

目前，在對新鑒定的傳染病病原的檢測方法主要是基于核酸水平的檢測，如PCR方法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法（real time PCR）和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增( loop-mediatedisothermal amplification， LAMP)反應(yīng)等方法。但是普通的PCR方法以及靈敏度更高的熒光定量PCR方法，均需要使用精密儀器，對實(shí)驗(yàn)人員有較高的技術(shù)要求等，無法在基層實(shí)驗(yàn)室廣泛使用。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法可在等溫條件下進(jìn)行高效、快速、高特異性的擴(kuò)增靶序列。該方法特異性強(qiáng)，靈敏度較PCR方法高，無需PCR儀器等貴重儀器，僅需要普通水浴鍋調(diào)節(jié)溫度（60℃-65℃）。大大降低了檢測的費(fèi)用，特別適合基層和現(xiàn)地使用。目前，還未見針對環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)反應(yīng)方法，但該屬其他類型病毒如PCV1和PCV2均已經(jīng)有相應(yīng)的LAMP檢測方法。本發(fā)明的建立可填補(bǔ)國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域空白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測豬圓環(huán)病毒3型的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的引物組。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

所述檢測豬圓環(huán)病毒3型的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法的引物組，是由一對外引物和一對內(nèi)引物組成，其中所述的外引物由F3和B3，內(nèi)引物由FIP和BIP組成。上述2對引物的序列如下：

F3：5’- GGCAGTGGATGATGAAGCG-3’，

B3： 5’- TGCCTCCACACTCCACAAT-3’，