[發(fā)明專利]一種治療流感嗜血桿菌引起鼻竇炎的血清及該血清的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710756593.8
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107602697B
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫愛華;嚴(yán)杰;劉小香;黃燕穎
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;C07K16/12;C12N15/70;A61K39/40;A61P11/02
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

一種治療流感嗜血桿菌引起鼻竇炎的血清及該血清的應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。該血清由重組蛋白MAP?rHap?C4?GGGS?Hap?C150免疫得到。該血清（及血清10倍稀釋液）具有有效殺菌功能。由于該血清除具有殺菌作用的抗體成份外其余成份與人體血清成份相似，如經(jīng)無菌、生物安全處理，制成鼻竇炎滴鼻液用于鼻竇炎治療，則具有易于吸收，不使用激素，不會產(chǎn)生依賴性，適合嬰幼兒使用的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療流感嗜血桿菌引起鼻竇炎的血清及該血清的應(yīng)用。

背景技術(shù)

流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae，Hi）為寄生于人鼻咽部及上呼吸道的革蘭陰性小桿菌，呼吸道為主要入侵門戶，可引起全身多部位的感染。流感嗜血桿菌是引起急性細菌性鼻竇炎的主要病原菌之一。流感嗜血桿菌可分為莢膜型和無莢膜型，前者可用莢膜抗體分為6個血清型，故莢膜型Hi又稱為可分型流感嗜血桿菌（typeable H. influenzae，THi）；后者無法用莢膜多糖抗體分型，故無莢膜型Hi又稱為不可分型流感嗜血桿菌（nontypeable H. influenzae，NTHi）。目前臨床報道70%～98%臨床分離株為NTHi。

阻止Hi黏附定植，減少細菌微菌落的形成是防治流感嗜血桿菌感染的關(guān)鍵，已有的研究顯示Hap蛋白不僅是位于流感嗜血桿菌外膜的黏附因子，NTHi和THi均有表達，同時還可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生具有免疫保護作用的黏膜S-IgA和血清IgG，血清IgG能阻止NTHi在呼吸道的黏附定植, 減少細菌微菌落的形成，因此Hap 蛋白誘導(dǎo)機體產(chǎn)生的IgG很有希望成為治療流感嗜血桿菌感染的抑菌或殺菌制劑的成份。然而研究發(fā)現(xiàn)在流感嗜血桿菌生長過程中，Hap 表達量達到一定程度后，就會啟動自體解離，最終導(dǎo)致細菌的分散和在呼吸道內(nèi)的傳播，因此普通的細菌培養(yǎng)不足以獲得足夠的Hap蛋白，要獲得大量Hap蛋白作為抗原制備抗體需進行生物學(xué)改造。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計提供一種治療流感嗜血桿菌引起鼻竇炎的血清及該血清的應(yīng)用的技術(shù)方案。

所述的一種治療流感嗜血桿菌引起鼻竇炎的血清，其特征在于由重組蛋白MAP-rHap-C4-GGGS-Hap-C150免疫得到。

所述的一種治療流感嗜血桿菌引起鼻竇炎的血清，其特征在于所述的MAP-rHap-C4-GGGS-Hap-C150通過以下步驟得到：

1）以流感嗜血桿菌基因組DNA為模板，采用連接引物 PCR 分別擴增帶柔性肽結(jié)構(gòu)的hap-C4和hap-C150片段構(gòu)建流感嗜血桿菌黏附Hap蛋白優(yōu)勢表位融合基因hap-C4-GGGS-hap-C150；

2）以pUCm-T^{-hap-C4-GGGS-hap-C150}為模板，采用引物攜帶EK序列互補構(gòu)建hap-C4-GGGS-hap-C150-EK串聯(lián)表位融合片段；以pUCm-T^{-8[hap-C4-GGGS-hap-C150-EK]}為模板，擴增獲得NdeI-8×[Hap-C4-GGGS- Hap-C150-EK]-XhoI片段；

3）以NdeI-8×[Hap-C4-GGGS- Hap-C150-EK]–XhoI構(gòu)建原核表達系統(tǒng)EcoliBL21DE3^{pET42a-8×[Hap-C4-GGGS-Hap-C150-EK]}，原核表達系統(tǒng)Ecoli BL21DE3^{pET42a-8×[Hap-C4-GGGS-Hap-C150-EK]}誘導(dǎo)表達重組融合蛋白8×[rHap-C4-GGGS-Hap-C150-EK]，重組融合蛋白8×[rHap-C4-GGGS-Hap-C150-EK]水解提純得到rHap-C4-GGGS-Hap-C150融合表位肽；