[發明專利]一種用于診斷MITF易位性腎癌的分離探針組合及其應用

有效

• 申請號: 201710753790.4
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107299152B
• 公開（公告）日: 2020-03-03
• 發明（設計）人: 饒秋;夏秋媛;魏雪;王璇;李芳秋;周曉軍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍南京軍區南京總醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6841;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;夏平

本發明公開了一種用于診斷MITF易位性腎癌的分離探針組合及其應用。一種用于診斷MITF易位性腎癌的分離探針組合，該組合由BAC克隆探針RP11?26P2和BAC克隆探針RP11?963H1組成。本發明根據MITF易位性腎癌的特點，設計結合在MITF基因兩端的熒光標記DNA探針組合，在石蠟包埋組織切片的基礎上進行原位雜交，檢測融合及分離信號，可大大提高診斷該類腫瘤的準確率。采用本發明提供的探針組合進行檢測MITF易位性腎癌，不但方便、快速、可靠而且成功率高，可用于制備MITF易位性腎癌診斷試劑盒，為MITF易位性腎癌的快速準確的診斷提供了新的工具。

技術領域

本發明屬于熒光原位雜交探針應用領域，涉及一種用于診斷MITF易位性腎癌的分離探針組合及其在制備MITF易位性腎癌診斷試劑中的應用。

背景技術

2016年新版WHO腎臟腫瘤病理組織學分類新增了一種腎細胞癌類型：MiT家族易位性腎細胞癌。MiT家族是小眼畸形轉錄因子家族(microphthalmia-associatedtranscription factor family)的縮寫，該家族成員包括MITF，TFE3、TFEB和TFEC基因。

目前已經發現的MiT家族易位性腎細胞癌包括Xp11.2易位/TFE3基因融合相關性腎細胞癌和t(6；11)(p21；q12)易位/TFEB基因融合相關性腎癌。MITF和TFEC基因易位的腫瘤在世界范圍內暫無文獻報道。

MiT家族易位性腎細胞癌致病機理清晰明確，MiT家族成員基因(TFE3/TFEB)的易位是其關鍵致病因素：這類腫瘤均涉及MiT家族成員基因同其它染色體易位及其所致形成融合基因，通過啟動子變換從而高表達TFE3/TFEB融合蛋白，而TFE3/TFEB作為一個轉錄因子，通過與特異的DNA結構相結合，轉錄調控體內多種基因表達最終致病。目前至少有10種不同的易位伴侶和融合基因被報道，包括ASPL-TFE3、PRCC-TFE3、SFPQ-TFE3、NONO-TFE3、CLTC-TFE3、LUC7L3-TFE3、KHSRP-TFE3、PARP14-TFE3、DVL2-TFE3、RBM10-TFE3和MALAT1-TFEB等，每例腫瘤內僅存在單一的易位形式。

MiT家族易位性腎細胞癌是一罕見類型腫瘤，TFE3基因易位性腎癌約占所有腎細胞癌的1.6％-4％，TFEB基因易位性腎癌相對更加罕見。但該疾病以發病年齡輕為突出特征，占兒童腎細胞癌的40％，且造成極其沉重的家庭及社會負擔。此外，有明確證據表明MiT家族易位性腎細胞癌的患者對血管內皮生長因子受體(vascular endothelial growthfactor receptor，VEGFR)或哺乳動物雷帕霉素(mammalian target of rapamycin，mTOR)分子靶向治療敏感。另有研究表明，MET酪氨酸激酶為ASPL-TFE3融合基因的靶基因，并有望成為TFE3易位性腫瘤的治療靶點。因此，精確診斷此類腫瘤顯得十分重要。

本發明團隊通過高通量測序技術，在一例形態學符合MiT家族易位性腎細胞癌特征的病例中檢測出PRCC-MITF融合基因，該融合基因型為首次發現，國內外均無報道，且這是國際首次發現MITF基因易位相關性腎細胞癌。由于以往沒有針對該基因易位的檢測手段，可以猜想，以往的MITF基因易位相關性腎細胞癌都被誤診或漏診了。

目前高通量測序是唯一可以明確未知易位位點的檢測手段，然而高通量測序費用高昂，檢測周期長，檢測平臺稀缺，對樣品質量要求高，不利于普及推廣，對于大多數患者來說也不是首選檢測手段。

染色體熒光原位雜交(FISH)始于傳統的細胞遺傳學和DNA技術的結合，快速靈敏、特異性好，可以檢測隱匿或微小的染色體畸變以及復雜核型；還可以使用多種熒光標記，顯示DNA片段及基因之間的相對位置與方向，空間定位精確。此外，FISH的方法，可以在石蠟包埋的樣本上進行回顧性研究，大大降低了對研究樣本的要求。目前，利用熒光原位雜交(FISH)診斷該腫瘤的方法國內外均無報道。