[發明專利]用于鑒別稻米脂肪酸品質的DNA分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201710751127.0
• 申請日: 2017-08-28
• 公開（公告）號: CN107299151B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 余四斌;孫文強;夏雨;張麗婷;袁志陽
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.稻米亞油酸/亞麻酸品質基因分型的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測水稻樣品的DNA；

2)以DNA為模板，利用引物OSFA3F和OSFA3R進行PCR擴增；

3)分析PCR擴增產物；

引物OSFA3F和OSFA3R的序列如下：

OSFA3F:5′-GGCGGAAAGGGAGAAGAG-3′

OSFA3R:5′-TAGGGACATAGCAAAGCAAAGG-3′。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中PCR反應體系為：DNA模板100ng，10×PCR buffer 2ul，2mM dNTP混合液2ul，10uM引物OSFA3F和OSFA3R各0.3ul，rTaq DNA聚合酶0.1ul，ddH₂O補至20ul；

PCR擴增程序設置為：94℃預變性4分鐘；94℃變性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸30秒，循環32次；72℃延伸7分鐘，結束反應。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟3)中PCR擴增產物在4％聚丙烯酰胺凝膠中電泳檢測，若電泳結果出現一條大小為182bp的特征條帶，則待測水稻的稻米亞麻酸含量高，而亞油酸/亞麻酸含量比值較低；若電泳結果出現一條大小為190bp的特征條帶，則待測水稻的稻米亞麻酸含量低，而亞油酸/亞麻酸含量比值較高；若電泳結果出現上述兩條特征條帶，則待測水稻為雜合型。

4.用于鑒別稻米脂肪酸品質的DNA分子標記在改良水稻品種亞油酸/亞麻酸品質中的應用；所述DNA分子標記位于水稻OsFAD3基因的5’UTR區域，其核苷酸序列如下：5′-AGGAAGGA-3′；

由含有上述DNA分子標記的水稻植株結實所產生的稻米中亞麻酸的含量顯著低于缺失上述DNA分子標記的水稻植株所產稻米；由含有上述DNA分子標記的水稻植株結實所產生的稻米中亞油酸與亞麻酸含量的比值顯著高于缺失上述DNA分子標記的水稻植株所產稻米。

5.用于鑒別稻米脂肪酸品質的DNA分子標記在鑒別或選育亞油酸/亞麻酸高品質水稻品種中的應用；

所述DNA分子標記位于水稻OsFAD3基因的5’UTR區域，其核苷酸序列如下：5′-AGGAAGGA-3′；

由含有上述DNA分子標記的水稻植株結實所產生的稻米中亞麻酸的含量顯著低于缺失上述DNA分子標記的水稻植株所產稻米；由含有上述DNA分子標記的水稻植株結實所產生的稻米中亞油酸與亞麻酸含量的比值顯著高于缺失上述DNA分子標記的水稻植株所產稻米。

6.用于鑒別稻米脂肪酸品質的DNA分子標記在亞油酸/亞麻酸品質水稻分子標記輔助育種中的應用；

所述DNA分子標記位于水稻OsFAD3基因的5’UTR區域，其核苷酸序列如下：5′-AGGAAGGA-3′；

由含有上述DNA分子標記的水稻植株結實所產生的稻米中亞麻酸的含量顯著低于缺失上述DNA分子標記的水稻植株所產稻米；由含有上述DNA分子標記的水稻植株結實所產生的稻米中亞油酸與亞麻酸含量的比值顯著高于缺失上述DNA分子標記的水稻植株所產稻米。