[發明專利]一種人體免疫復合因子的制備方法及應用在審

申請號：	201710741900.5	申請日：	2017-08-25
公開（公告）號：	CN108354946A	公開（公告）日：	2018-08-03
發明（設計）人：	肖定璋	申請（專利權）人：	肖定璋
主分類號：	A61K35/17	分類號：	A61K35/17;A61K35/15;A61P35/00;A61P37/04;A61P39/06;A61K35/14
代理公司：	佛山幫專知識產權代理事務所(普通合伙) 44387	代理人：	顏春艷
地址：	510000 廣東省廣州***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	復合因子制備人外周血單個核細胞誘導人體免疫淋巴細胞單個核細胞機體免疫力外源性細胞小分子物質細胞單核細胞肌肉酸痛臨床效果免疫功能有效生物作用機理抗衰老提取物外周血除雜凍融多肽擴增臍血發熱破碎乏力腫瘤保存疾病治療運輸應用
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【權利要求書】：

1.一種人體免疫復合因子的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)人外周血單個核細胞的分離：通過儀器單采或人工抽取人外周血，肝素抗凝處理及Ficoll密度梯度離心法分離得到單個核細胞；

2)人外周血單個核細胞的培養與誘導：將所得的單個核細胞重懸并置于AIM-V無血清培養基培養，調整細胞濃度為1×10⁶個/mL，同時加入植物血凝素使得植物血凝素在體系中所占含量為10-100ug/mL，繼續置于37℃、5％的CO₂孵箱中培養，以后隔日補加AIM-V無血清培養液，培養5-10天，使細胞濃度至少達到1×10⁷個/mL，收獲細胞；

3)細胞的純化除雜：將收獲的細胞用生理鹽水洗滌三次，以除去培養液中所有成分；

4)細胞破碎和產物收集：在收集的細胞中加入生理鹽水，將細胞稀釋成2×10⁶個/mL懸液，經超聲粉碎并重復凍融裂解處理后，離心收集上清即為免疫復合因子，冷凍保藏即可。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述外周血包括臍血。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)和步驟4)中離心操作的條件為4℃、2000rpm/min，離心時間為5分鐘。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中，加入的植物血凝素在體系中所占含量為50ug/mL。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3)中，用生理鹽水洗滌后的細胞需檢測以排除細菌、真菌、內毒素污染。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟4)中，超聲粉碎的條件為15-25kHz，次數至少3次，每次10秒。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟4)中，凍融裂解為-20℃～-196℃溫度條件下凍結，室溫條件下融化，凍融操作重復至少3次。

8.根據權利要求1～7任一項所述的制備方法制備得到的人體免疫復合因子作為免疫制劑在臨床上提高機體免疫力和治療衰老、腫瘤、自身免疫性疾病、神經性疾病、艾滋病的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述應用的具體方法為：

a)將免疫制劑以1：20的比例加入生理鹽水袋中，靜脈滴注，3日1次，5次為一個療程；

b)直接采用免疫制劑進行局部肌肉注射或者腫瘤局部注射，1-5mL/次。