[發(fā)明專利]一種可以鑒別牛肉及其制品的性別來源的熒光標(biāo)記擴增檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710735915.0
• 申請日: 2017-08-24
• 公開（公告）號: CN109136348A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李翔;葛斌文;陳拓
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇蘇博生物醫(yī)學(xué)科技南京有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種可以鑒別牛肉及其制品的性別來源的熒光標(biāo)記擴增檢測試劑盒，包括牛基因組DNA、2.5×PCR緩沖液、引物混合物和PCR水(ddH2O)。本發(fā)明還公開了一種可以鑒別牛肉及其制品的性別來源的熒光標(biāo)記擴增檢測方法，包括樣本DNA的提取；在PCR反應(yīng)管中添加試劑；放入PCR擴增儀中進(jìn)行擴增；PCR產(chǎn)物的檢測；分型分析。本發(fā)明通過PCR擴增反應(yīng)，產(chǎn)生帶有熒光標(biāo)記的產(chǎn)物片段，并通過ABI3100遺傳分析儀進(jìn)行電泳和檢測，檢測結(jié)果為單峰時，表明樣本來源為母牛，結(jié)果為雙峰時，則為公牛，本發(fā)明中建立了牛肉及其制品的性別來源鑒定方法，具有檢測快速、精準(zhǔn)、特異性強、靈敏度高、操作簡便的特點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動物源成分的性別鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種可以鑒別牛肉及其制品的性別來源的熒光標(biāo)記擴增檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術(shù)

牛肉是一種營養(yǎng)價值較高的保健型食品，具有高蛋白、低脂肪、低膽固醇的特點，并且含有人體所需的一切必需氨基酸。而隨著生活水平的不斷提高，牛肉消費群體的增大，人們對肉類的品質(zhì)提出了更高的要求，牛肉品質(zhì)追求更高的營養(yǎng)價值、觀賞價值、賞味價值甚至是功能性食品價值。

牛肉的品質(zhì)與性別密切相關(guān)，不同性別對牛肉品質(zhì)的影響主要表現(xiàn)在大理石花紋、嫩度和風(fēng)味上。一般來說，公牛肉的嫩度較閹牛和母牛的差，母牛肉較閹牛肉差，閹牛中公閹牛肉的嫩度也比母閹牛和母牛的差，但也有公牛肉嫩度較好的報道。在肉的色澤和感官特征方面，閹牛和小母牛也要好于公牛。在酮體品質(zhì)和肉品質(zhì)方面，公牛肉一般酮體較長，肩、背、腰部脂肪厚度小，脂肪率低，瘦肉多，腿部、肩部等優(yōu)質(zhì)切塊的比例較高，屠宰率卻較低，而母牛肉則相反。此外，調(diào)查表明，牛肉的味道也促進(jìn)牛肉消費的重要因素，而性別對于風(fēng)味有著顯著的影響，其主要是通過性激素的產(chǎn)生、代謝的遺傳控制以及性激素對脂肪組成和代謝的影響來發(fā)揮作用，其中，雄性激素會增加蛋白質(zhì)的沉積，減少脂肪合成，進(jìn)而使肌肉的芳香特性大為降低，并產(chǎn)生特殊的膻味。

我國牛肉產(chǎn)量位居世界第三，但出口量很小，近年來我國牛肉進(jìn)出口貿(mào)易波動較大，但總的來看出口大于進(jìn)口，一直是牛肉的凈出口國，而在國際貿(mào)易中需要對牛肉的性別進(jìn)行鑒定，為此我們提出一種可以鑒別牛肉及其制品的性別來源的熒光標(biāo)記擴增檢測試劑盒及其檢測方法用于解決上述問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種可以鑒別牛肉及其制品的性別來源的熒光標(biāo)記擴增檢測試劑盒及其檢測方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種可以鑒別牛肉及其制品的性別來源的熒光標(biāo)記擴增檢測試劑盒，該試劑盒包括2.5×PCR緩沖液、引物混合物、熱啟動Taq酶5U/μ以及PCR水，所述反應(yīng)混合物含2.5×PCR緩沖液包括5.0mM MgCl2、0.5mM eachdNTP、125mM Tris-HCl、125mM KCl 和1.5mg/mL BSA。

優(yōu)選的，所述引物混合物包括一條帶有熒光標(biāo)記的上游引物ZF-F：5′ -TTGGTAAGGTGTTCAGGATGGTT-3′，兩條下游引物ZFY-R：該兩條引物分別為5′-GGGAGAGTACTTGTAAATGTGTTCAG-3′和5′ -GTTAAGCAGCAAGTAGCCTA ACATAG-3′，其中上游引物的5′所帶的熒光染料為FAM。

一種可以鑒別牛肉及其制品的性別來源的熒光標(biāo)記擴增檢測方法，包括以下步驟：

步驟一：待檢測樣本DNA的提取，DNA提取采用Chelex-100法；

步驟二：在PCR反應(yīng)管中按下表進(jìn)行加樣：

步驟三：將PCR反應(yīng)管放入PCR擴增儀中進(jìn)行擴增，PCR擴增程序為： 98℃1min；98℃20s、60℃75s、72℃30s，30個循環(huán)；72℃終延伸5min；4-16 ℃保持；