[發(fā)明專利]用于診斷不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的增強子RNA組合、引物組及應(yīng)用和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710735738.6
• 申請日: 2017-08-24
• 公開（公告）號: CN107447008B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陸春城;黃振遙;范赟;韓秀梅;黃曉敏;韓莉;夏彥愷;王心如
• 申請（專利權(quán)）人: 南京醫(yī)科大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京思創(chuàng)大成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11614
• 代理人: 王堯

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及用于診斷不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的增強子RNA組合、引物組及應(yīng)用和試劑盒。所述增強子RNA組合包括：與SEQ ID NO：1所示核苷酸序列具有90％以上同源性的第一增強子RNA、與SEQ ID NO：2所示核苷酸序列具有90％以上同源性的第二增強子RNA和與SEQ ID NO：3所示核苷酸序列具有90％以上同源性的第三增強子RNA。本發(fā)明利用篩選出的增強子RNA組作為新的標志物，制備用于不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)診斷或監(jiān)測的試劑盒，具有靈敏度高、檢出譜系廣、成本低等優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，更具體地，涉及用于診斷不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的增強子RNA組合、引物組，以及增強子RNA組合與引物組的應(yīng)用和試劑盒。

背景技術(shù)

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指臨床上連續(xù)2次或2次以上的孕20W前或胎兒體重不足500g的妊娠丟失，其發(fā)生率約占妊娠結(jié)局的1％～3％。RSA的病因極其復(fù)雜，目前已明確的病因有染色體異常、生殖解剖結(jié)構(gòu)異常、內(nèi)分泌失調(diào)、生殖系統(tǒng)感染、自身免疫和環(huán)境因素等，但臨床上仍有50％～60％的RSA找不到明確的病因，稱為不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)。胚胎發(fā)育異常是發(fā)生URSA的主要原因。胚胎發(fā)育是有機體從其生命起始到成熟的復(fù)雜進程，受一系列環(huán)境因素、遺傳因素和表觀遺傳修飾的調(diào)控。

近年來，長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)重要生物學功能的發(fā)現(xiàn)使其成為生命科學研究的一大焦點，它們可在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄以及轉(zhuǎn)錄后等多個層面上調(diào)控基因的表達。在整個基因組轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中，lncRNA所占的比例遠遠超過編碼RNA所占的比例。不同于編碼RNA，lncRNA的保守性要差得多，然而在其分子內(nèi)部，卻含有較為保守的局部區(qū)段，且其表達具有時空特異性，這些現(xiàn)象都提示了lncRNA具有重要的生物學功能。

當lncRNA與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合之后，lncRNA能與目的基因形成染色質(zhì)環(huán)從而調(diào)控靶基因的時空表達。2010年Greenberg在小鼠神經(jīng)細胞中發(fā)現(xiàn)，分布在整個基因組中、由神經(jīng)細胞去極化作用所激活的增強子均被轉(zhuǎn)錄，且增強子轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的lncRNA與增強子鄰近的基因所轉(zhuǎn)錄的mRNA相關(guān)聯(lián)。Rosenfeld等研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細胞中，雌激素與其受體結(jié)合會誘導(dǎo)lncRNA的轉(zhuǎn)錄，進而提高特定基因的表達，通過RNAi技術(shù)去除這些lncRNA，會減弱增強子上調(diào)基因表達的能力，同時減少增強子與啟動子之間的成環(huán)現(xiàn)象。在胚胎發(fā)育方面，lncRNA的作用也正逐漸被證實。大量研究表明，lncRNA是胚胎發(fā)育和疾病發(fā)生過程中關(guān)鍵性的轉(zhuǎn)錄元件，可能是決定胚胎發(fā)育中基因時空表達的最早期分子之一，參與調(diào)控生長發(fā)育相關(guān)的基因。Samir等報道胚胎心臟發(fā)育受到lncRNA及其靶基因調(diào)控，lncRNA在胚胎干細胞向心肌細胞分化過程中發(fā)揮了一定作用。

lncRNA大多轉(zhuǎn)錄自“基因沙漠區(qū)”，但有些可以轉(zhuǎn)錄自基因組上的增強子(enhancer)元件，這類lncRNA被稱為增強子RNA(enhancer RNA,eRNA)。增強子是DNA上可與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的區(qū)域，可以位于基因上游，也可位于基因下游，甚至遠離受調(diào)控的基因，且常伴有組蛋白的不同修飾。當與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合之后，增強子能與目的基因形成染色質(zhì)環(huán)從而調(diào)控靶基因的時空表達。

目前還沒有將增強子RNA應(yīng)用于不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)輔助診斷的報道，若能篩選出不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)的增強子RNA作為生物標志物，并研制相應(yīng)的診斷試劑盒，對不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的診斷現(xiàn)狀必將是一次有力的推動，也為其藥物篩選、藥效評價及靶向治療開辟了一條新的途徑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供用于診斷不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的增強子RNA組合、引物組及應(yīng)用和試劑盒。