[發明專利]一種基于高通量測序檢測非小細胞肺癌致癌基因突變的多重PCR引物、試劑盒和方法有效
| 申請號： | 201710732983.1 | 申請日： | 2017-08-23 |
| 公開（公告）號： | CN107723354B | 公開（公告）日： | 2021-09-07 |
| 發明（設計）人： | 林釗;張燕菲;張紀斌;何廣良;周艷河;何銘輝 | 申請（專利權）人： | 廣州永諾健康科技有限公司;廣州永諾醫學檢驗所有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6869 | 分類號： | C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州三環專利商標代理有限公司 44202 | 代理人： | 宋靜娜;郝傳鑫 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 通量 檢測 細胞 肺癌 致癌 基因突變 多重 pcr 引物 試劑盒 方法 | ||
1.一種基于高通量測序構建非小細胞肺癌致癌基因文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）第一輪PCR擴增：以待檢樣本的基因組DNA為模板，用擴增引物混合液 R1-barcode、R2-barcode 分別進行 PCR 擴增，獲得第一輪PCR產物，所述R1- barcode包括SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:98所示的引物，所述R2-barcode包括SEQ ID NO:99～SEQ ID NO:196所示的引物；序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO: 196所示的引物為帶barcode序列的下游引物；所述引物的5’端具有接頭序列，所述引物的3’端具有特異性引物序列；所述barcode序列位于所述接頭序列和所述特異性引物序列之間，所述barcode序列是序列長度為10bp的DNA序列；
（2）第二輪PCR擴增：將步驟（1）中由R1-barcode擴增獲得的PCR產物用擴增引物混合液F1-non barcode以及通用的下游引物進行PCR擴增，將步驟（1）中由R2-barcode擴增獲得的PCR產物用擴增引物混合液F2-non barcode以及通用的下游引物進行PCR擴增，所述F1-nonbarcode包括SEQ ID NO:197～SEQ ID NO:294所示的引物，所述F2-non barcode包括SEQID NO:295～SEQ ID NO:392所示的引物，所述通用的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:393所示；序列如SEQ ID NO:197～SEQ ID NO: 392所示的引物為不帶barcode的上游引物；
（3）第三輪PCR擴增：將步驟（2）獲得的PCR 產物混合后純化，再用接頭引物進行第三輪PCR擴增，得到測序文庫。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中接頭引物為用于Illumina測序儀測序文庫構建的接頭引物。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于廣州永諾健康科技有限公司;廣州永諾醫學檢驗所有限公司，未經廣州永諾健康科技有限公司;廣州永諾醫學檢驗所有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201710732983.1/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
