[發(fā)明專利]針對GPCR:G蛋白復(fù)合物的結(jié)合結(jié)構(gòu)域及來自其的用途

在審

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• 申請日: 2012-06-21
• 公開（公告）號: CN107857810A
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·斯泰亞特;E·帕頓;T·拉爾曼斯;B·科比爾卡;S·拉斯穆森;S·格拉涅爾;R·K·蘇娜哈拉
• 申請（專利權(quán)）人: 非營利性組織佛蘭芒綜合大學(xué)生物技術(shù)研究所;布魯塞爾自由大學(xué);利蘭斯坦福青年大學(xué)托管委員會;密執(zhí)安大學(xué)董事會
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C07K16/28;C07K14/47;G01N33/68
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所11247
• 代理人: 張莉,黃革生

1.篩選特異性結(jié)合包含GPCR和G蛋白的復(fù)合物的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的方法，方法包括步驟：

a)提供多個結(jié)合結(jié)構(gòu)域，和

b)在所述多個結(jié)合結(jié)構(gòu)域中，篩選與包含GPCR和G蛋白的復(fù)合物結(jié)合的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，和

c)分離與復(fù)合物結(jié)合的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中復(fù)合物還包含GPCR的配體，優(yōu)選GPCR的激動劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，還包括：

從分離的結(jié)合結(jié)構(gòu)域中，篩選阻止GTPγS引起的GPCR/G蛋白復(fù)合物解離的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3之任一項(xiàng)的方法，還包括：

從分離的結(jié)合結(jié)構(gòu)域中，篩選特異性結(jié)合GPCR/G蛋白復(fù)合物中的G蛋白的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，還包括：

從分離的結(jié)合結(jié)構(gòu)域中，篩選特異性結(jié)合位于所述G蛋白的α和β亞基之間的界面上的構(gòu)象表位的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

6.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，還包括：

從分離的結(jié)合結(jié)構(gòu)域中，篩選特異性結(jié)合限于所述G蛋白的α亞基的構(gòu)象表位的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6之任一項(xiàng)的方法，其中結(jié)合結(jié)構(gòu)域是VHH結(jié)構(gòu)域。

8.產(chǎn)生特異性結(jié)合包含GPCR和G蛋白的復(fù)合物的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的方法，方法包括步驟：

a)用GPCR/G蛋白復(fù)合物免疫動物以產(chǎn)生多個結(jié)合結(jié)構(gòu)域；和

b)根據(jù)權(quán)利要求1-7之任一項(xiàng)的方法，在所述多個結(jié)合結(jié)構(gòu)域中，篩選與包含GPCR和G蛋白的復(fù)合物特異性結(jié)合的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中用于免疫的復(fù)合物還包含GPCR的配體，優(yōu)選GPCR的激動劑。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其中動物是駱駝類動物(camelid)。

11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中結(jié)合結(jié)構(gòu)域是VHH結(jié)構(gòu)域。

12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中產(chǎn)生多個納米抗體，包括：

從駱駝類動物分離B細(xì)胞樣品；和

從所述樣品產(chǎn)生納米抗體文庫。

13.通過權(quán)利要求1至12之任一項(xiàng)的方法獲得的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

14.權(quán)利要求13的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的用途，用于使復(fù)合物穩(wěn)定在功能構(gòu)象狀態(tài)，所述復(fù)合物包含GPCR和G蛋白和任選的受體配體。

15.根據(jù)權(quán)利要求14的用途，用于阻止復(fù)合物在鳥嘌呤核苷酸或其類似物存在下解離。

16.根據(jù)權(quán)利要求13的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的用途，用于使復(fù)合物結(jié)晶和/或解析復(fù)合物結(jié)構(gòu)，所述復(fù)合物包含GPCR和G蛋白和任選的受體配體。

17.根據(jù)權(quán)利要求13的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的用途，用于篩選調(diào)控GPCR的信號傳遞活性的化合物。

18.根據(jù)權(quán)利要求14至17的任一項(xiàng)的用途，其中GPCR處于活性構(gòu)象中。

19.鑒別能夠選擇性結(jié)合包含GPCR和G蛋白及任選地受體配體的復(fù)合物的化合物的方法，方法包括步驟：

(i)根據(jù)權(quán)利要求1-7之任一項(xiàng)的方法，篩選特異性結(jié)合復(fù)合物的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述復(fù)合物包含GPCR和G蛋白及任選地受體配體；

(ii)提供復(fù)合物；

(iii)使復(fù)合物與結(jié)合結(jié)構(gòu)域接觸，允許結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合復(fù)合物；

(iv)提供測試化合物；

(v)評估測試化合物是否結(jié)合復(fù)合物；和

(vi)篩選選擇性結(jié)合復(fù)合物的化合物。

20.確定包含GPCR和G蛋白及任選地受體配體的復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)的方法，方法包括步驟：

a)根據(jù)權(quán)利要求1-7之任一項(xiàng)的方法，篩選特異性結(jié)合復(fù)合物的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述復(fù)合物包含GPCR和G蛋白及任選地受體配體；

b)允許結(jié)合結(jié)構(gòu)域與包含GPCR和G蛋白的復(fù)合物結(jié)合；和

c)使步驟b)中形成的復(fù)合物結(jié)晶。