[發(fā)明專利]LncRNA作為診治骨肉瘤的分子標志物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710725189.4
• 申請日: 2017-08-22
• 公開（公告）號: CN107365859B
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊承剛;石小峰
• 申請（專利權(quán)）人: 固安博健生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;A61K31/7105;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種用于骨肉瘤篩查的長鏈非編碼RNA的檢測及其應(yīng)用，具體是利用長鏈非編碼表達譜芯片技術(shù)，通過差異分析，篩選到一條在骨肉瘤組織中顯著低表達的lncRNA，命名為LINC01996。與正常癌旁組織相比，LINC01996在骨肉瘤組織中顯著低表達，并在大樣本熒光定量PCR實驗中進一步證實LINC01996在骨肉瘤組織中的表達量明顯低于正常癌旁組織。LINC01996將進一步豐富骨肉瘤發(fā)病機制的研究，也為骨肉瘤的早期診斷及預后監(jiān)測提供了新的腫瘤標志物和治療靶點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學領(lǐng)域，涉及LncRNA作為診治骨肉瘤的分子標志物。

背景技術(shù)

骨肉瘤是來源于間葉組織的惡性腫瘤，其主要致病特征為體內(nèi)增殖的腫瘤細胞直接形成未成熟骨或骨樣組織。是一種人類骨骼系統(tǒng)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤。典型的骨肉瘤是一種罕見的(占全部惡性腫瘤的0.2％)高致癌惡性腫瘤，其發(fā)病率約每年每一百萬人里有三例。骨肉瘤主要出現(xiàn)在較長的骨骼以及少部分的軟組織。其主要發(fā)病人群集中在10～20歲青少年，具有發(fā)病率高，早期轉(zhuǎn)移率高，治愈生存率低等特點。X-射線，斷層攝影技術(shù)，核磁共振，血管造影技術(shù)以及動態(tài)骨閃爍攝影技術(shù)等廣泛應(yīng)用于該病的診斷、腫瘤發(fā)生的程度及手術(shù)類型判斷等等。但是利用上述臨床手段進行骨肉瘤的診斷，常常導致患者的病情延誤，錯過最佳治療時期。因此尋找一種骨肉瘤早期診斷標志物是亟待解決的問題。

人體中編碼蛋白質(zhì)的基因大約有2-3萬個，僅占人類基因組的2％，其余98％不編碼蛋白質(zhì)的基因組DNA最初被認為是沒有功能的，是生物體中的垃圾，通常被稱為“垃圾DNA”。但目前的研究表明，這些垃圾DNA大多可轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生非編碼RNA(non-coding RNA，ncRNA)。根據(jù)成熟轉(zhuǎn)錄本大小的不同，ncRNA可分為小分子ncRNA(如siRNA，miRNA，piRNA等)，中等長度ncRNA(70-200nt) 和長ncRNA(long ncRNA，LncRNA，>200nt)。

目前，ncRNA領(lǐng)域研究較多的是小分子ncRNA，而對LncRNA的研究還處于起步階段。由于序列內(nèi)部存在過多的終止密碼子，LncRNA不能被翻譯成蛋白質(zhì)，他們通常是以RNA轉(zhuǎn)錄本的形式行使其生物學功能，如發(fā)育過程中的細胞分化、細胞增殖、細胞凋亡和類固醇代謝等。

最近的研究發(fā)現(xiàn)LncRNA與肺癌、非霍杰金淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤和慢性淋巴細胞白血病等腫瘤疾病有關(guān)。這表明LncRNA與細胞的癌變有著極為密切的聯(lián)系，LncRNA在細胞增殖、分化和癌變中發(fā)揮著重要的作用。目前，已經(jīng)克隆的人類lncRNAs基因已超過4萬多個，但絕大部分lncRNA的功能未知。

目前，有關(guān)LncRNA在骨肉瘤的發(fā)病機制、疾病診斷及治療方面的研究基本空白，因此本申請利用生物信息學分析研究探討LncRNA在骨肉瘤的發(fā)病機制、疾病診斷及治療方面的作用，同時為后續(xù)深入研究提供實驗基礎(chǔ)及研究方向。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于診治骨肉瘤的長鏈非編碼RNA標志物。本發(fā)明利用芯片和QPCR實驗證明LINC01996在骨肉瘤組織中的表達水平明顯低于在癌旁組織中的水平，因此可以將LINC01996作為診治骨肉瘤的分子標志物。

為了實驗上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了檢測長鏈非編碼RNA表達的試劑在制備骨肉瘤輔助診斷或預后預測產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明的長鏈非編碼RNA在NCBI中的命名為LINC01996，其基因ID： 102724660，LINC01996的轉(zhuǎn)錄本序列是Genbank登錄號NR_145431.1(具有 1270bp的長度，相應(yīng)的DNA序列如SEQ ID NO.1所示)。

進一步，所述試劑包括利用SYBR Green、TaqMan探針、分子信標、雙雜交探針、或復合探針檢測LINC01996表達量時使用的PCR擴增引物。