[發明專利]春雷霉素在柑橘中的檢測方法

有效

• 申請號: 201710722474.0
• 申請日: 2017-08-22
• 公開（公告）號: CN107764915B
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 張昌朋;許振嵐;陳列忠;胡秀卿;蒼濤;湯濤;何紅梅;俞建忠;張春榮;吳珉
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 何碧珩

本發明提供春雷霉素在柑橘中的檢測方法，包括：柑橘分離、柑橘橘皮提取、柑橘橘皮凈化、柑橘橘肉提取、柑橘橘肉凈化，或者柑橘全果提取、柑橘全果凈化；測定，添加回收率試驗，測定最小檢出量，確定最低檢測濃度。本方法的前處理過程相對簡單，回收率高，重復性好，凈化分離效果好，而且最低檢測濃度比較低，適合于春雷霉素在柑橘全果、橘肉、橘皮中的分析檢測。

技術領域

本發明涉及農藥檢測，尤其涉及春雷霉素在柑橘中的檢測。

背景技術

春雷霉素(Kasugamycin)是一種由小金色放線菌產生的農用抗菌素類殺菌劑，屬于微生物農藥，是以生物體如細菌、真菌、病毒等微生物為原料而制成的，這類農藥的特點是安全可靠，不污染環境，對人畜不產生公害，而且原料易獲得，生產成本低，是當前農作物病蟲害防治中具有廣闊發展前景的一種農藥。

春雷霉素化學名稱為(5-氨基-2-甲基-6-(2，3，4，5，6-羥基環己基氧代)

四氫吡喃-3-基)氨基-α-亞氨醋酸；化學結構式為

化學分子式C₁₄H₂₅O₉N₃，分子量379.36。春雷霉素純品為白色結晶，鹽酸鹽為白色針狀或片狀結晶，有甜味。純品在有機溶劑中難溶，在25℃水中溶解12.5％(W/V)；鹽酸鹽易溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯等有機溶劑。在酸性或中性介質中較穩定，遇堿易破壞失效。

春雷霉素是水溶性農藥，難溶于有機溶劑。對春雷霉素的分析多采用HPLC、UPLC-MS/MS、生物測定法(抑菌圈法)等；研究報道有關于春雷霉素在水稻、黃瓜、土豆、番茄、辣椒、西葫蘆、萵苣、蘋果、甜瓜、西瓜、煙葉、土壤和水中的檢測方法。但是關于春雷霉素在柑橘上的檢測方法未見報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種春雷霉素在柑橘中的檢測方法，能夠對柑橘中的春雷霉素殘留進行檢測，滿足農藥殘留分析中對準確度、精密度和靈敏度的要求。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案是：春雷霉素在柑橘中的檢測方法，包括以下步驟：

(1)柑橘分離：將柑橘全果分離為柑橘橘肉和柑橘橘皮；

(2)柑橘橘肉前處理：

(2.1)柑橘橘肉提?。悍Q取5g柑橘橘肉樣品，置于50mL離心管中，加入20mL提取液，超聲提取30分鐘，提取后在4000rpm離心5min后，轉移到旋轉蒸發瓶中，樣品中加入10mL上述相同的提取液，超聲提取15分鐘，并按照上述步驟重復提取2次，提取完畢后收集所有的提取液到旋轉蒸發瓶中，40℃條件下旋轉蒸發掉甲醇，提取液用水補充到大于28mL，用氨水調pH值到5.0，用水定容至30mL，過0.45μm有機濾紙后，待凈化；

(2.2)柑橘橘肉凈化：5mL甲醇和5mL水依次分別添加進活化MCX小柱；12mL提取液上樣、5mL水和5mL甲醇依次分別淋洗MCX小柱，固相萃取裝置抽空MCX小柱2min；6mL含5％氨水的甲醇洗脫MCX小柱，洗脫液在40℃條件下吹干，用2mL定容液將洗脫液溶解定容到2.0mL，過0.22μm有機針式濾器，待測定；

(3)柑橘橘皮前處理：

(3.1)柑橘橘皮提取：稱取5g柑橘橘皮樣品置于50mL離心管中，加入20mL提取液，超聲提取30分鐘，提取后4000rpm離心5min后，轉移到旋轉蒸發瓶中，樣品中加入10mL上述相同的提取液，超聲提取15分鐘，并按照上述步驟重復提取2次，提取完畢后收集所有的提取液到旋轉蒸發瓶中，40℃條件下旋轉蒸發掉甲醇，提取液用水補充到大于28mL，用氨水調pH值到5.0，用水定容至30mL，過0.45μm有機濾紙后，待凈化；